豚鼠γ干擾素elisa試劑盒實驗原理：

用純化的MT抗體包被微孔板，制成固相載體，往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、*化的MT抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物（TMB）顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的MT呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

豚鼠γ干擾素elisa試劑盒實驗意事項

1.血清標(biāo)本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時間保存，應(yīng)在-70℃以下。

2.在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

3.吸取液體時速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，吸取的量不夠準(zhǔn)確。

4.樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶，如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。1．5 吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。

5.液體全部加入酶標(biāo)孔后，將酶標(biāo)板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應(yīng)。

6.孵育時要使蓋板膜封好酶標(biāo)板，防止水分蒸發(fā)，以防曲線不成線性。

7.實驗前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出，使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶標(biāo)板只要取出所需量。

8.由于底物顯色劑對光及其敏感，因此要避光保存。

要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色

9.手工洗板時每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。

10.檢測吸光度前應(yīng)將酶標(biāo)儀打開，將其預(yù)熱30min以上。

11.底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃**具有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸皮膚。

12.孵育的時間應(yīng)該嚴(yán)格按照試劑盒說明書上的時間為準(zhǔn)。

13.要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。

14.冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。

15.對樣本的結(jié)果有疑問時需要使用其他檢測方法進(jìn)行驗證。

16.沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。

17.標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。