本公司專業(yè)提供“大鼠白細(xì)胞分化抗原44elisa試劑盒”試劑盒,產(chǎn)品種類齊全，質(zhì)量保證，提供：

售前：為客戶提供全面技術(shù)咨詢服務(wù)并提供說明書，任何咨詢都會(huì)細(xì)心答復(fù)，無(wú)論購(gòu)買與否。

售后：所有的elisa試劑盒如有質(zhì)量問題，免費(fèi)包換，為客戶提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，每個(gè)技術(shù)性的問題都會(huì)為你耐心解決。

大鼠白細(xì)胞分化抗原44elisa試劑盒標(biāo)本收集:

1.血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃**后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無(wú)熱原，無(wú)內(nèi)毒素試管。

2.血漿：抗凝劑*使用EDTA，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)。避免使用溶血，高血脂標(biāo)本。

3. 其它生物標(biāo)本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)

4. 標(biāo)本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。

5.標(biāo)本收集后若不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃/-80℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融，1-6月內(nèi)檢測(cè),4℃保存的應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

6. 如果您的樣本中檢測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui高值，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù))。

溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定成敗zui為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相免疫測(cè)定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。溫育所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間相對(duì)較短。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。
溫育這一步是臨床ELISA測(cè)定中zui容易出現(xiàn)問題的步驟。通常目前國(guó)內(nèi)ELISA商品試劑盒的反應(yīng)溫育時(shí)間為37℃ 30分鐘～1小時(shí)，elisa試劑盒則通常為37℃ 1～2小時(shí)才能有較*的結(jié)合，低于1小時(shí)，可能會(huì)影響測(cè)定下限。因此，關(guān)于溫育，在實(shí)際測(cè)定操作中一定要注意以下幾點(diǎn)：
(1)要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時(shí)間。一般來(lái)說，加完樣本和/或反應(yīng)試劑后，將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時(shí)，孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃，需要一定的時(shí)間，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下，這段升溫時(shí)間可能還比較長(zhǎng)，而在臨床實(shí)驗(yàn)室中，很少有人注意這個(gè)問題，通常是將微孔板一放入溫箱即開始計(jì)時(shí)，這樣就很容易造成實(shí)際測(cè)定中溫育時(shí)間不夠，弱陽(yáng)性樣本測(cè)不出來(lái)的問題。曾有一地處南方的血站同行提出了一個(gè)問題，就是在每一年的冬季總有那么一個(gè)多月的時(shí)間，在做HBsAg測(cè)定的室內(nèi)質(zhì)控中，測(cè)定由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心供應(yīng)的1 ng/ml弱陽(yáng)性樣本時(shí)，總是測(cè)不出來(lái)，不知原因?yàn)楹?？這可能就與南方冬天室內(nèi)溫度較低有關(guān)，此時(shí)微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時(shí)間不夠，以致弱陽(yáng)性樣本測(cè)定為陰性。因此，為保證37℃下足夠的溫育時(shí)間，臨床實(shí)驗(yàn)室可自行確定本實(shí)驗(yàn)室不同季節(jié)(不同室溫下)微孔板從室溫拿至溫箱后需要多長(zhǎng)時(shí)間孔內(nèi)溫度才能達(dá)到37℃，從而適當(dāng)延長(zhǎng)板條在溫箱中的放置時(shí)間。具體的做法是，用一小溫度計(jì)放置板孔反應(yīng)溶液中測(cè)量觀察即可。

在中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括：

(1)固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

(2)包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說通常為1～10μg/ml。

(3)酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。

(4) 酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是雙氧水在臨用前加入。