ELISA試劑盒通常常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,假如包被的抗原在堿性條件下不安穩(wěn)的話,也能夠運(yùn)用pH7.2的磷酸鹽緩沖液.
3.包被溫度的挑選
通常是4-8度條件下過(guò)夜或許37度保溫2小時(shí),咱們強(qiáng)烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的堅(jiān)持.
4.包被濃度的挑選
包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)改變,通常蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml,要清晰對(duì)于特定包被抗原的zui適包被濃度需求經(jīng)過(guò)試驗(yàn)來(lái)斷定.
包板后需求關(guān)閉嗎？應(yīng)當(dāng)挑選什么樣的關(guān)閉系統(tǒng)？
關(guān)閉是否必要,取決于ELISA試劑盒的形式及詳細(xì)的試驗(yàn)條件.通常說(shuō)來(lái),雙抗體夾心法,只需酶符號(hào)物是高活性的,操作時(shí)洗刷*,不經(jīng)關(guān)閉也可得到滿足的成果.而在直接法測(cè)定中,關(guān)閉通常是*的.
以測(cè)定抗原為例，受檢抗原和酶標(biāo)抗原競(jìng)賽與固相抗體，因而于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量成反比。操作過(guò)程如下：
(1)將特異抗體與固相載體銜接，構(gòu)成固相抗體。洗刷。
(2) 待測(cè)管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液，使之與固相抗體反響。如受檢標(biāo)本中無(wú)抗原，則酶標(biāo)抗原能順暢地與固相抗體。如受檢標(biāo)本中含有抗原，則 與酶標(biāo)抗原以同樣的時(shí)機(jī)與固相抗體，競(jìng)賽性地占去了酶標(biāo)抗原與固相載體的時(shí)機(jī)，使酶標(biāo)抗原與固相載體的量削減。參閱管中只加酶標(biāo)抗原，保溫 后，的可達(dá)zui充分的量。
(3)加底物顯色：參閱管中因?yàn)榈拿笜?biāo)抗原zui多，故色彩zui深。參閱管色彩深度與待測(cè)管色彩深度之差，代表受檢標(biāo)本抗原的量。待測(cè)管色彩越淡，表明標(biāo)本中抗原含量越多。
ELISA試劑盒直接法、競(jìng)賽法、捕獲法，運(yùn)用親和素和*的ELISA試劑盒親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中獲取。分子量60kD，每個(gè)分子由4個(gè)亞基構(gòu)成，能夠和4個(gè)*分子親密。如今運(yùn)用更多的是從鏈霉菌中獲取的鏈霉親和 素。*又稱維生素H，分子量244.31，存在于蛋黃中。用化學(xué)辦法制成的衍生物，*-羥 基琥珀亞胺酯(BNHS)可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的巨細(xì)分子構(gòu)成*化的產(chǎn)品。親和素與*的，雖不屬免疫反響，但特異性強(qiáng)，親和力大， 兩者一經(jīng)就極為安穩(wěn)。因?yàn)?個(gè)親和素分子有4個(gè)*分子的方位，能夠銜接更多的*化的分子，構(gòu)成一種相似晶格的復(fù)合體。因而把親和素和生物 素與ELISA試劑盒偶聯(lián)起來(lái)，就可大大提高ELISA試劑盒的敏感度。
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