脂肪酸代謝系列_脂氧合酶LOX測(cè)試盒_微量法
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
LOX廣泛存在于動(dòng)植物組織中，催化不飽和脂肪酸氧化反應(yīng)，導(dǎo)致膜脂過(guò)氧化。在生物體的生長(zhǎng)發(fā)育、成熟衰老及逆境脅迫過(guò)程中具有重要作用。
脂肪酸代謝系列_脂氧合酶LOX測(cè)試盒_微量法
測(cè)定原理：
LOX催化氧化，氧化產(chǎn)物在280nm處有特征吸收峰；測(cè)定280nm吸光度增加速率，來(lái)計(jì)算LOX活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1支，4℃保存。
粗酶液提?。?/p>
按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測(cè)。
測(cè)定：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到280 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 在試劑三中加入10mL試劑二（振蕩混勻1min），在30℃水浴中預(yù)熱10 min以上。用不完的試劑4℃保存。
3. 對(duì)照管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL樣本和180μL試劑二，30℃反應(yīng)30min后，記錄A對(duì)照。
4. 測(cè)定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL樣本和180μL試劑三，30℃反應(yīng)30min后，記錄A測(cè)定。
5. ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照
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