糖酵解系列_果糖1,6二磷酸醛縮酶FBA測(cè)試盒
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
植物葉綠體中果糖 1,6-二磷酸醛縮酶是光合作用中參與 calvin 循環(huán)的重要酶。催化果糖 1,6-二磷酸和景天庚酮糖 1,7-二磷酸的合成反應(yīng)，在各種逆境脅迫下表現(xiàn)不同的響應(yīng)。
測(cè)定原理：
果糖 1,6-二磷酸醛縮酶催化果糖 1,6-二磷酸生成 3-磷酸甘油醛和磷酸二羥丙酮，在磷酸丙糖異構(gòu)酶和 α-磷酸甘油脫氫酶作用下催化NADH和磷酸二羥丙酮生成NAD和α-磷酸甘油，340nm 處吸光值的變化可反映果糖 1,6-二磷酸醛縮酶活性的高低。
糖酵解系列_果糖1,6二磷酸醛縮酶FBA測(cè)試盒
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、震蕩儀、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板。
試劑組成和配制：
提取液一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
提取液二：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加 2mL 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加 2 mL 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加 2 mL 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑
酶液提取：
①總 FBA 酶提?。航ㄗh稱(chēng)取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎 3s，間歇 7s，總時(shí)間 1min），然后 4℃，8000g 離心 10min，取上清測(cè)定。②胞漿和葉綠體 FBA 酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5～10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一），冰浴勻漿后于 4℃，200g 離心 5min，棄沉淀，取上清在 4℃，8000g 離心 10min，取上清用于測(cè)定胞漿 FBA 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎 3s，間歇 7s，總時(shí)間 1min），然后4℃，8000g 離心 10min，取上清測(cè)定葉綠體中 FBA 酶活性。
建議測(cè)定總 FBA 酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的 FBA，則按照步驟②提取粗酶液。
測(cè)定操作：
1.紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2.取微量石英比色皿/96 孔板，依次加入 100μL 試劑一，20μL 試劑二，20μL 試劑三，20μL試劑四，20μL 試劑五，20μL 粗酶液，充分混勻，記錄 340nm 處 10s 的吸光值 A1 和 310s的吸光值 A2，△A=A1-A2
環(huán)保在線