果糖16二磷酸醛縮酶FBA測試盒_糖酵解系列
測定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
植物葉綠體中果糖1,6-二磷酸醛縮酶是光合作用中參與calvin循環(huán)的重要酶。催化果糖1,6-二磷酸和景天庚酮糖1,7-二磷酸的合成反應,在各種逆境脅迫下表現(xiàn)不同的響應。
果糖16二磷酸醛縮酶FBA測試盒_糖酵解系列
測定原理:
果糖1,6-二磷酸醛縮酶催化果糖1,6-二磷酸生成3-磷酸甘油醛和磷酸二羥丙酮,在磷酸丙糖異構(gòu)酶和α-磷酸甘油脫氫酶作用下催化NADH和磷酸二羥丙酮生成NAD和α-磷酸甘油,340nm處吸光值的變化可反映果糖1,6-二磷酸醛縮酶活性的高低。
自備實驗用品及儀器:
天平、低溫離心機、震蕩儀、研缽、紫外分光光度計、1 mL石英比色皿。
試劑組成和配制:
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體25mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加5mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加5 mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑四:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加5 mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑五:液體×1瓶,4℃避光保存;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
酶液提?。?/p>
①總FDA酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定。
②胞漿和葉綠體FDA酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測定胞漿FDA酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定葉綠體中FDA酶活性。
建議測定總FDA酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FDA,則按照步驟②提取粗酶液。