糖酵解系列_葡萄糖-6-磷酸(6PG)測試盒
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
6PG (Glucose-6-phosphate,葡萄糖-6-磷酸,又稱6-磷酸葡萄糖),是糖酵解和磷酸戊糖途徑的中間產(chǎn)物,廣泛存在于動植物體和微生物中。在糖酵解的步反應中,葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸,然后通過磷酸葡萄糖異構酶的催化形成果糖-6-磷酸,以繼續(xù)糖酵解的其它步驟;而在戊糖磷酸途徑中,葡萄糖-6-磷酸是其個底物,該過程也是生成NADPH的主要途徑。此外,葡萄糖-6-磷酸也能轉化形成糖原或淀粉而被儲存起來。
糖酵解系列_葡萄糖-6-磷酸(6PG)測試盒
測定原理:
6-磷酸葡萄糖脫氫酶可催化6PG和NADP+生成6磷酸葡萄糖酸和NADPH,NADPH在1-mPMS的作用下使WST-8顯橙,在450 nm下測定吸光值。
需自備的儀器和用品:
酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、96孔板、研缽、冰、蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體60 mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體12mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;
試劑三:液體1.5mL×1管, 4℃避光保存。
6PG提?。?nbsp;
1、細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次), 8000g,25℃離心10min,取上清待測。
2、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿,8000g,25℃離心10min,取上清待測。
3、血清(漿)等液體樣品:直接測定。