氧化與抗氧化系列_丙二醛(MDA)測試盒
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意 :正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
氧自由基作用于脂質(zhì)的不飽和脂肪酸,生成過氧化脂質(zhì);后者逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合物,其中包括MDA。通過檢測MDA的水平即可檢測脂質(zhì)氧化的水平。
氧化與抗氧化系列_丙二醛(MDA)測試盒
測定原理:
MDA與(thiobarbituric acid,TBA)縮合,生成紅色產(chǎn)物,在532nm有大吸收峰,進行比色后可估測樣品中過氧化脂質(zhì)的含量;同時測定600nm下的吸光度,利用532nm與600nm下的吸光度的差值計算MDA的含量。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配置:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體30mL×1瓶,4℃保存;
注意事項:
臨用前注意試劑一是否*溶解,如未溶解,可以70℃-90℃加熱,并振蕩以促進溶解。
MDA提取:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟:
1、吸取0.3mL 試劑一于1.5mL離心管中,再加入0.1mL樣本, 混勻。
2、95℃水浴中保溫30min(蓋緊,防止水分散失),置于冰浴中冷卻,10000g,25℃,離心10min。
3、吸取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中,測定532nm和600nm處的吸光度,記為A532和A600,ΔA= A532-A600。