甲基檸檬酸合酶(MCS)測(cè)試盒_三羧酸循環(huán)系列
測(cè)定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
MCS廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中，與檸檬酸合酶（CS）共同參與三羧酸循環(huán)的調(diào)節(jié)。
甲基檸檬酸合酶(MCS)測(cè)試盒_三羧酸循環(huán)系列
測(cè)定原理：
MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生甲基檸檬酰COA，進(jìn)一步水解產(chǎn)生甲基檸檬酸；該反應(yīng)促使無(wú)色的DTNB轉(zhuǎn)變成的TNB，在 412nm處有特征吸光值。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、無(wú)水乙醇和蒸餾水
試劑組成和配制：
試劑一：液體25mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：液體5mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：液體0.5mL×1支，-20℃保存；
試劑四：液體25mL×1瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑×1支，4℃保存，臨用前加入800μL無(wú)水乙醇；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑六：粉劑×2支，-20℃保存，臨用前加入400μL蒸餾水；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑七：粉劑×1支，-20℃保存，臨用前加入800μL蒸餾水；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
樣本的前處理：
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
①稱取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
②將勻漿600g，4℃離心5min。
③棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
④上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的CS（此步可選做）。
⑤在步驟④中的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），用于線粒體CS測(cè)定。
環(huán)保在線