果糖6磷酸1磷酸轉(zhuǎn)移酶PFP測(cè)試盒光合作用
測(cè)定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
注 意 :正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶(PFP,EC2.7.1.90)是一種胞質(zhì)酶,廣泛存在于植物組織中,催化果糖-6-磷酸與果糖-1,6-二磷酸之間的可逆轉(zhuǎn)化,在光合作用碳代謝中起重要作用。
果糖6磷酸1磷酸轉(zhuǎn)移酶PFP測(cè)試盒光合作用
測(cè)定原理:
PFP催化6-磷酸果糖轉(zhuǎn)化為1,6-二磷酸果糖,它在醛縮酶和磷酸丙糖異構(gòu)酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)?-磷酸甘油醛,再由3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH催化生成3-磷酸甘油酸、NAD和磷酸,340nm處的吸光度變化反映了PFP的活性的高低。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)、1 mL石英比色皿。
試劑組成和配制:
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體30mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃避光保存。臨用前加5mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加5 mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑四:液體0.5mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑五:液體0.5mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑六:液體5mL×1瓶,4℃避光保存。
酶液提?。?br/>
1.組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心10min,取上清置冰上待測(cè)。
2.細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置冰上待測(cè)。
3.液體:直接檢測(cè)。
測(cè)定操作:
1.分光光度計(jì)預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2.取1mL石英比色皿,依次加入580μL試劑一,100μL試劑二,100μL試劑三,10μL試劑四,10μL試劑五,100μL試劑六,100μL粗酶液,充分混勻,記錄340nm處10s的吸光值A(chǔ)1和310s的吸光值A(chǔ)2,
△A=A1-A2