光合作用系列_丙酮酸磷酸雙激酶PPDK測(cè)試盒
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
丙酮酸磷酸雙激酶（pyruvate phosphate dikinase, PPDK, EC 2.7.9.1）是C4途徑和景天科酸代謝途徑的限速酶，催化ATP、丙酮酸和Pi經(jīng)三步反應(yīng)生成磷酸烯醇式丙酮酸。該酶主要存在于C4植物的葉綠體基質(zhì)中，對(duì)光合功能具有重要調(diào)節(jié)作用。
光合作用系列_丙酮酸磷酸雙激酶PPDK測(cè)試盒
測(cè)定原理：
PPDK的逆向反應(yīng)催化磷酸烯醇式丙酮酸、AMP和PPi生成丙酮酸、ATP和Pi，乳酸脫氫酶進(jìn)一步催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+，在340nm測(cè)定NADH減少速率，計(jì)算PPDK活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體25 mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×2瓶，-20℃保存；
試劑三 ：液體40μL×1支，4℃保存；體積較少，若沾在管壁上，臨用前可低速離心后使用。
樣本的前處理：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟和加樣表：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定
（1）工作液的配制：臨用前取試劑二一瓶加入10mL試劑一和5μL試劑三，充分混勻，置于37℃水浴5min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL工作液，混勻，立即記錄340nm處初始吸光值A(chǔ)1和37℃反應(yīng)5min后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔA=A1-A2。
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