氨基酸代謝系列_鳥-氨酸轉(zhuǎn)氨酶(OAT)測試盒
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
脯-氨酸是植物體內(nèi)適應(yīng)逆境脅迫的一種重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。高等植物中脯-氨酸代謝因其初始底物不同,分為谷-氨酸( Glu) 和鳥-氨酸( Orn) 兩條合成途徑。鳥-氨酸轉(zhuǎn)氨酶( δ-OAT) 是 是以鳥-氨酸為前體合成脯-氨酸途徑的關(guān)鍵酶,對植物適應(yīng)逆境脅迫起關(guān)鍵作用。
氨基酸代謝系列_鳥-氨酸轉(zhuǎn)氨酶(OAT)測試盒
測定原理:
鳥-氨酸和α-酮戊二酸在鳥-氨酸轉(zhuǎn)氨酶和NADH作用下發(fā)生氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)生成吡咯啉-5-羧酸(P5C),同時產(chǎn)生NAD,通過檢測340nm處的吸光度的變化可反映出鳥-氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性的高低。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、研缽、酶標(biāo)儀、96孔板。
試劑組成和配制:
提取液:液體110mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體30 mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加8mL試劑一充分溶解;用不完的試劑4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加8mL試劑一充分溶解;用不完的試劑4℃保存。
試劑四:粉劑×2瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加4mL試劑一充分溶解;現(xiàn)配現(xiàn)用。
酶液提?。?/p>
1.組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心10min,取上清置冰上待測。
2.細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置冰上待測。
3.液體:直接檢測。