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ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)曲做不好是什么原因:
1、剛加完顯色劑時(shí)梯度明顯:顯色液可能是從高濃度向低濃度孔加的。
2、酶濃度太高,導(dǎo)致*后顯色結(jié)果都是高的
3、包被-酶標(biāo)系統(tǒng)不匹配或者酶標(biāo)的非特異反應(yīng)太強(qiáng),或者酶標(biāo)儀讀數(shù)范圍不夠,
4、樣本中有能夠催化底物的物質(zhì),沒(méi)洗下來(lái)。
5、建議:包被、酶標(biāo)重新做梯度,先用較低的濃度把梯度摸索好,然后再優(yōu)化靈敏度,*后調(diào)出所需的靈敏度、線性范圍
6、有條件的話,可以把酶免的蛋白系統(tǒng)移植到板式化學(xué)發(fā)光上,加完底物三分鐘讀數(shù)。
7、蛋白系統(tǒng)靈敏度夠的話,顯色十分鐘就差不多了。
8、酶是自己標(biāo)的這種情況的,HRP比例不要太高。
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