在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)條件（包含試劑）較難確保穩(wěn)定的情況下，這種判別法較為適宜。在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的A值后，核算S/N值。也有寫作P/N的，這里的P不代表陽性（positive），而是病（patient）的縮寫，不該誤解。為防止混雜，更宜用S/N表示。在前期的間接法ELISA試劑盒中，有些作者定出S/N為陽性規(guī)范，現(xiàn)多為各種測定所沿襲。
ELISA試劑盒實(shí)際上每一測定體系應(yīng)該用實(shí)驗(yàn)求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)注意的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，致使反響后發(fā)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。陽性斷定值（cut-off value）通常為陰性對照A值加上一個(gè)特定的常數(shù)，以此作為判別成果陽性或陰性的規(guī)范。ELISA試劑盒用此法判別成果請求實(shí)驗(yàn)條件非常穩(wěn)定，陽性和陰性的對照品應(yīng)契合必定的規(guī)格，須配用精細(xì)的儀器，并嚴(yán)厲按規(guī)定操作。陽性斷定值公式中的常數(shù)是在這特定的體系中經(jīng)過對很多標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)檢查而得到的。
現(xiàn)舉某種檢查HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿，陽性對照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml。每次實(shí)驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽性對照和3個(gè)陰性對照。測得A值后，先核算陰性對照A值的平均數(shù)（NCX）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX），兩個(gè)平均數(shù)的差（P-N）必須大于一個(gè)特定的數(shù)值（例0.400），實(shí)驗(yàn)才有用。3個(gè)陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此規(guī)模，則棄去，罷了另兩個(gè)陰性對照重新核算NCX；如有兩個(gè)陰性對照A值超出以上規(guī)模，則該次實(shí)驗(yàn)無效。
陽性斷定值按下式核算： 
ELISA試劑盒陽性斷定值=NCX+0.05 標(biāo)本A值＞陽性斷定值的為陽性，小于陽性斷定值的為陰性。應(yīng)注意的是，式中0.05為該試劑盒的常數(shù)，只適合于該特定條件下，ELISA試劑盒而不是對各種試劑均可通用。