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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)用于在體外將微量的目標(biāo)DNA大量擴(kuò)增,以便進(jìn)行分析。
反應(yīng)體系:①樣品DNA;②引物(primer),是人工合成的一對(duì)寡核苷酸鏈(約15-20個(gè)核苷酸),用于擴(kuò)增夾在雙引物與模板DNA互補(bǔ)區(qū)之間的區(qū)域;③4種dNTP;④Tag DNA聚合酶,是從一種嗜熱水生(中分離出來(lái)的。此酶zui適作用溫度為75~80℃,但短時(shí)間在95℃下不失活。⑤適宜的緩沖體系和適量的Mg2+。
反應(yīng)過(guò)程:①變性:將反應(yīng)液置于PCR儀中,提高溫度(約90-95℃)使DNA雙鏈解離;②復(fù)性:降溫(約60℃左右)退火,使引物與模板結(jié)合;③延伸:升溫度至70-75℃,在引物的引導(dǎo)下合成模板單鏈的互補(bǔ)鏈,從而形成DNA雙鏈片段;④重復(fù)上述“變性——復(fù)性——延伸"的過(guò)程。zui初幾次循環(huán)中形成的長(zhǎng)鏈DNA較多,但隨著反應(yīng)的進(jìn)行,長(zhǎng)鏈DNA以算術(shù)級(jí)數(shù)增加,而夾在兩個(gè)引物之間的目標(biāo)DNA以指數(shù)級(jí)數(shù)增長(zhǎng),經(jīng)大約20—30次循環(huán)后,擴(kuò)增產(chǎn)物中主要是目標(biāo)DNA。
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