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在競(jìng)爭(zhēng)法ELISA試劑盒中,陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競(jìng)爭(zhēng)抑制物的量,一般調(diào)節(jié)陰性對(duì)照的吸光度在1.0-1.5之間,此時(shí)反應(yīng)zui為敏感。在實(shí)驗(yàn)條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下,這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的A值后,計(jì)算S/N值。
也有寫作P/N的,這里的P不代表陽性(positive),而是病人(patient)的縮寫,不應(yīng)誤解。為避免混淆,更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA試劑盒中,有些作者定出S/N為陽性標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)多為各種測(cè)定所沿用。實(shí)際上每一該用求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)注意的是,N所代表的陰性對(duì)照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對(duì)照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因此,這類ELISA試劑盒規(guī),如N<0.05(或其他數(shù)值),則按0.05計(jì)算,否則將出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
抑制率表示標(biāo)本在競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合中標(biāo)本對(duì)陰性反應(yīng)顯色的抑制程度,按下式計(jì)算:
抑制率(%)= (陰性對(duì)照A值-標(biāo)本A值)×100%/陰性對(duì)照A值
ELISA試劑盒一般規(guī)定抑制率≥50%為陽性,<50%為陰性。
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