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鹿紅細胞膜蛋白(EMP)ELISA試劑盒

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更新時間:2018-05-18 21:21:29瀏覽次數:247次

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鹿紅細胞膜蛋白(EMP)ELISA試劑盒

實驗材料與試劑配制:

1.儀器與材料:酶標儀(使用前預熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。

2. 洗液的配制:按1:30的比例配制洗液備用。

三.樣品收集、處理及保存

1.細胞培養(yǎng)上清:適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

2)細胞:用PBS反復洗滌細胞3次,調整細胞濃度達到104-106/ml 左右,通過反復凍融,使細胞破壞并放出細胞內成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。

3)血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。

4)血漿:應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

5)體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

6.)組織標本:切取組織標本,稱取重量0.5mg,加入500ul PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。

樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

7)保存:如果樣品不能立即檢測,應將其分裝,-70 ℃保存,避免反復冷凍。保存過程中如出現沉淀,應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

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評價方法
◎1)發(fā)質控物進行調查,這是目前國內外常見的形式,采用定期發(fā)放質控物至各實驗室,各實驗室在規(guī)定的日期進行檢驗,并將結果報至組織者(部、省臨檢中心)。組織者通過統(tǒng)計分析,再將評價結果寄回實驗室,使其了解工作質量,發(fā)現問題,提高質量。其缺點為由于各實驗室吃小灶或互相打修改結果而達不到真正評價作用。
◎2)現場調查,事先不通知,臨時派出人員到各實驗室,規(guī)定采用常規(guī)方法,檢測一組標本,進行評價。這種方法可以解決實際問題,進行現場指導,組織者常因人力、物力的原因而不能經常性進行。

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