大鼠牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)ELISA試劑盒

酶標（ELISA，EIA）診斷試劑盒操作中出現(xiàn)的問題：現(xiàn)象、可能原因和解決辦法

1、 不同廠家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同，務必按照所用試劑盒嚴格操作，否則容易產(chǎn)生檢測結(jié)果的不確定性.

2、 若不同批號試劑的不同組分（A液或酶工作液），或不同試劑的不同組分進行交叉使用，有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高，花板等情形。

3、 加樣時樣品量誤差，對于陰或很陽的標本影響不大，但對閾值附近的標本影響*，建議校對加樣器。

4、 反應時間的誤差，做大量標本時，*孔和zui后一孔以及一些特殊標本可能影響較大。

5、 由于滴瓶的精密性肯定不如加樣器，不排除不同滴頭滴量的誤差。另外滴加過程中是否產(chǎn)生氣泡、速度是否均勻，是否顫動等影響液量的因素均可導致以上情況。高標準要求時應使用加樣器。

6、 閾值附近實際上是個灰區(qū)（gray scale）,不能截然分為陰性、陽性，國外廠家均要求對這部分可疑標本進行奇數(shù)次復檢，以次數(shù)多者為準，如一次陽兩次陰zui后判為陰，但實際上是否為陰不好說，只有判為可疑，臨床上可以讓患者過一段時間后再測。

7、 肉眼觀察稍顯色，酶標儀打印為陰性的標本在實際工作中是難以避免的，肉眼目測結(jié)果不可靠，應以酶標儀判讀為準。

8、 由陰性變?yōu)閺婈栃栽蚨酁椴僮鬟^程中漏加試劑等有關(guān)。

9、 臨界值附近標本波動為正?，F(xiàn)象，任何試劑均不可避免?？梢钥紤]將標本做奇數(shù)次復檢。

大鼠牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)ELISA試劑盒

在ELISA中，常用的酶為辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)和堿性磷酸酶(alkaline phosohatase, AP)。在少數(shù)商品ELISA試劑中，應用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。

國產(chǎn)ELISA試劑一般都用HRP制備結(jié)合物。HRP是一種糖蛋白，含糖量約為18%，分子量為44000，是一種復合酶，由主酶（酶蛋白）和輔基（亞鐵血紅素）結(jié)合而成，是一種卟啉蛋白質(zhì)。主酶無色糖蛋白在275nm波長處有zui高吸收峰，輔基是深棕色的含鐵卟啉環(huán)，在403nm波長處有zui高吸收峰。HRP的純度用RZ(Reinheit Zahl，德文，意為純度數(shù)）表示，是403nm的吸光度與280nm吸光度之比，高純度的HRP的RZ≥?.0。

大鼠牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)ELISA試劑盒