人IPO-38蛋白(IPO38)ELISA試劑盒

人IPO-38蛋白(IPO38)ELISA試劑盒操作步驟

    1. 包被抗原：用包被液將抗原作適當(dāng)稀釋, 一般為1～10微克/孔，每孔加200微升，37℃溫育1小時(shí)后，4℃冰箱放置16～18小時(shí)。

    2. 洗滌：倒盡板孔中液體，加滿洗滌液，靜放三分鐘，反復(fù)三次，zui后將反應(yīng)板倒置在吸水紙上，使孔中洗滌液流盡。

   3. 加封閉液200微升，37℃放置一小時(shí)。

   4. 洗滌同2。

   5. 加被檢血清：用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,，每孔200微升。同時(shí)作稀釋液對(duì)照。37℃放置2小時(shí)。

   6. 洗滌同2。

   7. 加辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時(shí)。

   8. 洗滌同2。

   9. 加底物：鄰苯二胺溶液加200ml，室溫暗處10--15分鐘。

   10. 加終止液：每孔50微升。

   11. 觀察結(jié)果：用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀記錄490nm讀數(shù)。

人IPO-38蛋白(IPO38)ELISA試劑盒

結(jié)合物制得后，在用作ELISA試劑前尚需確定其適當(dāng)?shù)墓ぷ鳚舛?。使用過濃的結(jié)合物，既不經(jīng)濟(jì)，又可使本底增高；結(jié)合物的濃度過低，則又影響檢測(cè)的敏感性。所以必須對(duì)結(jié)合物的濃度予以選擇。zui適的工作濃度就是指結(jié)合物稀釋至這一濃度時(shí)，能維護(hù)一個(gè)低的本底，并獲得測(cè)定的*靈敏度，達(dá)到zui合適的測(cè)定條件和測(cè)定費(fèi)用的節(jié)省。就酶標(biāo)抗體本身而言，它的有效工作濃度是指與其相應(yīng)抗原包被的載體作試驗(yàn)時(shí)，能得到陽性反應(yīng)的zui高稀釋度。例如某一HRP：抗人IgG制劑標(biāo)明的工作濃度為1:5000，表示該制劑經(jīng)1:5000稀釋后，在與人IgG包被的固相作ELISA試驗(yàn)時(shí)，將發(fā)生陽性反應(yīng)。但在用于具體的ELISA檢測(cè)中，酶標(biāo)抗體的zui適工作濃度受到固相載體的性質(zhì)、包被抗原或抗體的純度以及整個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)如標(biāo)本、反應(yīng)溫度和時(shí)間等的影響，因此必須在實(shí)際測(cè)定條件下進(jìn)行"滴配"選擇能達(dá)到高敏感度的zui大稀釋度作為試劑盒中的工作濃度。

人IPO-38蛋白(IPO38)ELISA試劑盒