人堿性磷酸酶(ALP)ELISA Kit說(shuō)明書(shū)
elisa 小知識(shí):
辣根過(guò)氧化物酶(HRP)是一種糖蛋白,每個(gè)分子含有一個(gè)氯化血紅素(protonhemin)區(qū)作輔基。酶的濃度和純度常以輔基的含量表示。氯化血紅素輔基的zui大吸收峰是403nm,HRP酶蛋白的zui大吸收峰是275nm,所以酶的濃度和純度計(jì)算式是(已知HRP的A(1cm 403nm 1%)=25,式中1%指HRP百分濃度為100ml含酶蛋白1g,即10mg/ml,所以,酶濃度以 mg/ml 計(jì)算是HRP的A(1cm 403nm mg/ml=2.5)HRP純度(RZ)=A403nm/A275nm純度RZ(Reinheit Zahl)值越大說(shuō)明酶內(nèi)所含雜質(zhì)越少。高純度HRP的RZ值在3.0左右,zui高可達(dá)3.4。用于ELISA檢測(cè)的HRP的RZ值要求在3.0以上。
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ELISA實(shí)驗(yàn)小竅門(mén):
影響ELISA中非特異性顯色的原因有很多,比如試劑盒特異性、檢驗(yàn)標(biāo)本中含酶標(biāo)記物的干擾物,操作過(guò)程中的問(wèn)題?,F(xiàn)在就這原因作一簡(jiǎn)要分析,以便可以通過(guò)以上措施把非特異顯色降至zui低限度,從而提高檢測(cè)的特異性,并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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