人破骨細(xì)胞分化因子(ODF)ELISA Kit說明書

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍然保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，所以可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。

人破骨細(xì)胞分化因子(ODF)ELISA Kit說明書

酶標(biāo)試劑盒操作中出現(xiàn)的問題：現(xiàn)象、可能原因和解決辦法：
1、 不同廠家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同，務(wù)必按照所用試劑盒嚴(yán)格操作，否則容易產(chǎn)生檢測結(jié)果的不確定性.
2、 若不同批號試劑的不同組分（A液或酶工作液），或不同試劑的不同組分進(jìn)行交叉使用，有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高，花板等情形。
3、 加樣時樣品量誤差，對于陰或很陽的標(biāo)本影響不大，但對閾值附近的標(biāo)本影響*，建議校對加樣器。
4、 反應(yīng)時間的誤差，做大量標(biāo)本時，*孔和zui后一孔以及一些特殊標(biāo)本可能影響較大。
5、 由于滴瓶的精密性肯定不如加樣器，不排除不同滴頭滴量的誤差。另外滴加過程中是否產(chǎn)生氣泡、速度是否均勻，是否顫動等影響液量的因素均可導(dǎo)致以上情況。高標(biāo)準(zhǔn)要求時應(yīng)使用加樣器。
6、 閾值附近實際上是個灰區(qū)（gray scale）,不能截然分為陰性、陽性，國外廠家均要求對這部分可疑標(biāo)本進(jìn)行奇數(shù)次復(fù)檢，以次數(shù)多者為準(zhǔn)，如一次陽兩次陰zui后判為陰，但實際上是否為陰不好說，只有判為可疑，臨床上可以讓患者過一段時間后再測。
7、 肉眼觀察稍顯色，酶標(biāo)儀打印為陰性的標(biāo)本在實際工作中是難以避免的，肉眼目測結(jié)果不可靠，應(yīng)以酶標(biāo)儀判讀為準(zhǔn)。
8、 由陰性變?yōu)閺婈栃栽蚨酁椴僮鬟^程中漏加試劑等有關(guān)。
9、 臨界值附近標(biāo)本波動為正?，F(xiàn)象，任何試劑均不可避免。可以考慮將標(biāo)本做奇數(shù)次復(fù)檢。

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