人脂肪酶elisa試劑盒操作步驟：

實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫，試劑不能直接在37 溶解；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)**樣品含量，如樣品濃度過高時，應(yīng)對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1、 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液 100 ，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100 ，注意不要有氣泡，加樣 時將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37 溫育2小時。為保證實驗結(jié)果有效

性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2、 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100 （臨用前配制），酶標(biāo)板加上覆膜，37 溫育1小時。

3、 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400 /每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4、 每孔加檢測溶液B工作液（臨用前配制）100 ，加上覆膜，37 溫育1小時。

5、 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6、 每孔加底物溶液90 ，酶標(biāo)板加上覆膜37 避光顯色（反應(yīng)時間控制在15-30分鐘，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯時，即可終止）。

7、 每孔加終止溶液50 ，終止反應(yīng)，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物 液的加入順序相同。

8、 立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度（OD值）。

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補充說明

1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。

2. 小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。而且，洗滌不充分將影響試驗結(jié)果。

3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn)。

4. 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。

6. 中、英文說明書可能會有不*之處，請以英文說明書為準(zhǔn)。

7. 所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

8. 有效期：6個月