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人皮膚癌細(xì)胞系HS-4細(xì)胞

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更新時(shí)間:2015-11-16 14:24:37瀏覽次數(shù):146次

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人皮膚癌細(xì)胞系HS-4細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)方法 
1、收到細(xì)胞,請(qǐng)查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請(qǐng)盡快。
2、收到細(xì)胞,如包裝完好,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過(guò)程中的問(wèn)題,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái),顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí),請(qǐng)不要打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶,應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右,讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,再于顯微鏡下觀察,此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁,請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理
3. 收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況 ,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過(guò)80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,留下 5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng):超過(guò)80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
4,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過(guò)的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時(shí)之需。
5 、24小時(shí)后,細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁,就可以傳代了。(貼壁細(xì)胞)將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細(xì)胞生長(zhǎng)面為準(zhǔn))PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消化,消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn),一般1-3分鐘,不超過(guò)5分鐘??梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁,見(jiàn)細(xì)胞脫落下來(lái),加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,1000rpm/5min。棄上清,視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù),一般一傳二,如細(xì)胞量多可一傳三,有些細(xì)胞不易傳得過(guò)稀,有些生長(zhǎng)較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶,以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。(懸浮細(xì)胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
6,貼壁細(xì)胞 ,懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無(wú)菌操作。換液時(shí),換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液,37度    5%CO2 培養(yǎng)
7.  收到細(xì)胞后,請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞,用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)離心收集細(xì)胞,接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養(yǎng)基,使用進(jìn)口胎牛血清. 剛接到細(xì)胞,若細(xì)胞不多時(shí) 血清濃度可以加到15%去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右 ,血清濃度還是在10%。
培養(yǎng)基參考
500ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基(含:必需與非必需氨基酸、維他命、有機(jī)與無(wú)機(jī)成分、激素、生長(zhǎng)因子與微量元素)、細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑、抗生素/抗菌素溶液或青霉素/鏈霉素(P/S)溶液、FBS,適合在飽和濕度為5%CO2與95%空氣的培養(yǎng)箱中使用
    "Recombinant Cys-Protein G
"
    "Recombinant Protein A/G
"
    "Recombinant Streptavidin
"
重組鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子    "Recombinant Human Serum Albumin
"
重組鼠腫瘤壞死因子-α    
重組鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-堿性    
重組鼠IGF-I    
重組鼠表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Endothelial Cell Growth Supplement
    Smooth Muscle Cell Growth Supplement
    Smooth Muscle Cell Growth Supplement
    Pericyte Growth Supplement
重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Meningeal Cell Growth Supplement
    Neural Precursor Cell Growth Supplement
    Neuronal Growth Supplement
    Neural Precursor Cell Differentiation Supplement
重組蛋白A    Oligodendrocyte Precursor Cell Growth Supplement
重組蛋白G    Oligodendrocyte Growth Supplement
重組半胱氨酸-蛋白G    Oligodendrocyte Precursor Cell Differentiation Supplement
重組蛋白A/G    Schwann Cell Growth Supplement
重組鏈霉親和素    Astrocyte Growth Supplement
重組人血清白蛋白    Astrocyte Growth Supplement-Animal
    Microglia Growth Supplement
    Macrophage Growth Supplement
    Keratinocyte Growth Supplement
內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子     BPE-free Keratinocyte Growth Supplement
平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Keratinocyte Growth Supplement-animal component free
平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)因子(不含血清)    Melanocyte Growth Supplement
周細(xì)胞生長(zhǎng)因子    TPA-free Melanocyte Growth Supplement
 腦膜細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Fibroblast Growth Supplement
神經(jīng)前體細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Fibroblast Growth Supplement-sf
 神經(jīng)元生長(zhǎng)因子    Fibroblast Growth Supplement-animal component free
神經(jīng)前體細(xì)胞分化生長(zhǎng)因子    Fibroblast Growth Supplement-2
 少突膠質(zhì)前體細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Tonsil Epithelial Cell Growth Supplement
 少突膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Oral Keratinocyte Growth Supplement
 少突膠質(zhì)前體分化生長(zhǎng)因子    Colonic Epithelial Cell Growth Supplement
 雪旺細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Bronchial Epithelial Cell Growth Supplement
 星形細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Small Airway Epithelial Cell Growth Supplement
 星形細(xì)胞生長(zhǎng)因子-動(dòng)物    Skeletal Muscle Cell Growth Supplement
小膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Epithelial Cell Growth Supplement
巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Epithelial Cell Growth Supplement-2
 角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Epithelial Cell Growth Supplement-animal
 角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子(不含 BPE)    Mesangial Cell Growth Supplement
 角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子(不含動(dòng)物成分)    Urothelial Cell Growth Supplement
 黑色素細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Prostate Epithelial Cell Growth Supplement
 黑色素細(xì)胞生長(zhǎng)因子(不含TPA)     Osteoblast Growth Supplement
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Chondrocyte Growth Supplement
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-sf    Synoviocyte Growth Supplement
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(不含動(dòng)物成分)    Nucleus Pulposus Cell Growth Supplement
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2    Hepatocyte Growth Supplement
扁桃體上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Slate Cell Growth Supplement
口腔角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子    StemGS? Human Embryonic Stem Cell Growth Supplement 50X 
結(jié)腸上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Xenofree Human Pluripotent Stem Cell Growth Supplement 50X
 支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Cardiac Myocyte Growth Supplement
 小氣道上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子    Corneal Epithelial Cell Growth Supplement

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