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所 在 地上海市
更新時(shí)間:2015-11-06 16:34:34瀏覽次數(shù):214次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 環(huán)保在線表達(dá)SV40T抗原人胚腎上皮細(xì)胞 293FT
ES-2人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞此細(xì)胞為我公司向ATCC細(xì)胞庫(kù)引進(jìn),細(xì)胞來源真實(shí)可靠。詳細(xì)說明書,請(qǐng)向客服索要,咨詢、定購(gòu)。齊一生物科技(上海)有限公司:021- 60348496。Web:www.qiyibio。。com
ES-2人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)方法
1、收到細(xì)胞,請(qǐng)查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請(qǐng)盡快。
2、收到細(xì)胞,如包裝完好,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過程中的問題,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí),請(qǐng)不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右,讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,再于顯微鏡下觀察,此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁,請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理
3. 收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況 ,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,留下 5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng):超過80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
4,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時(shí)之需。
5 、24小時(shí)后,細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁,就可以傳代了。(貼壁細(xì)胞)將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細(xì)胞生長(zhǎng)面為準(zhǔn))PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化,消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn),一般1-3分鐘,不超過5分鐘??梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁,見細(xì)胞脫落下來,加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,1000rpm/5min。棄上清,視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù),一般一傳二,如細(xì)胞量多可一傳三,有些細(xì)胞不易傳得過稀,有些生長(zhǎng)較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶,以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。(懸浮細(xì)胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
6,貼壁細(xì)胞 ,懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無(wú)菌操作。換液時(shí),換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液,37度 5%CO2 培養(yǎng)
7. 收到細(xì)胞后,請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞,用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)離心收集細(xì)胞,接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養(yǎng)基,使用進(jìn)口胎牛血清. 剛接到細(xì)胞,若細(xì)胞不多時(shí) 血清濃度可以加到15%去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右 ,血清濃度還是在10%。
培養(yǎng)基參考
500ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基(含:必需與非必需氨基酸、維他命、有機(jī)與無(wú)機(jī)成分、激素、生長(zhǎng)因子與微量元素)、細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑、抗生素/抗菌素溶液或青霉素/鏈霉素(P/S)溶液、FBS,適合在飽和濕度為5%CO2與95%空氣的培養(yǎng)箱中使用
生長(zhǎng)抑素
抗眼鏡蛇毒原血漿(馬源)
脫氧核糖胞嘧啶核苷酸鈉
脫氧核糖腺嘌呤核苷酸鈉
脫氧核糖胸腺嘧啶核苷酸鈉
脫氧核糖鳥嘌呤核苷酸鈉
一磷酸腺苷鈉
角鯊烯
γ-氨酪酸
賴脯胰島素
尤瑞克林
門冬酰胺酶(大腸桿菌)
門冬酰胺酶(歐文菌)
5'-胞苷酸
4'-羥基苯乙酸
5'-羥基吲哚乙酸
馬尿酸
苯乙酰谷氨酰胺
氧化型谷胱甘肽
門冬酰胺
門冬氨酸鳥氨酸
普羅瑞林
尖吻蝮蛇血凝酶
角鯊?fù)?br>戈那瑞林
門冬氨酸鎂
門冬氨酸鉀
L -肌肽
醋酸精氨酸
β-
肝素鈉
硫酸皮膚素
多
前列腺素A1
前列腺素B1
鈉
N-乙酰-半胱氨酸1-
脫蘇氨醇8奧曲肽
游離甲狀腺素
游離三碘甲狀腺原氨酸
洋地黃
垂體后葉
胰島素(豬)
豬胰島素(高純〕
肝素鈉
磷酸組胺
毒毛旋花子苷 G
人胰島素
硫酸
豬胰島素原
人絕經(jīng) (HMG)
人胰島素
縮宮素(合成)
促甲狀腺素(TSH)
促黃體生成激素(LH)
泌乳素
促卵泡生成素
生長(zhǎng)激素
β亞單位
人胎盤泌乳素(HPL)
鐵蛋白
癌胚抗原
甲胎蛋白
前列腺特異抗原
游離前列腺特異抗原
三碘甲腺原氨酸
甲狀腺素
反三碘甲腺原氨酸
人胰島素 C-肽
胰高血糖素
抗甲狀腺球蛋白抗體
人抗信號(hào)識(shí)別顆??贵w(SRP)檢測(cè)試劑盒
人封閉抗體(BA)檢測(cè)試劑盒
人抗細(xì)胞膜DNA抗體(cmDNA)檢測(cè)試劑盒
人抗鈣蛋白酶抑素抗體(ACAST-DⅣ)檢測(cè)it
人卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)檢測(cè)試劑盒
人抗核仁纖維蛋白抗體(AFAsnoRNPU3RNP)檢測(cè)試劑盒
人系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)檢測(cè)試劑盒
人抗髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體(MAGAb)檢測(cè)試劑盒
人抗中性粒細(xì)胞顆??贵w(ANGA)檢測(cè)試劑盒
人抗中性粒細(xì)胞抗體(ANA)檢測(cè)試劑盒
人抗載脂蛋白抗體A1(ApoA1)檢測(cè)試劑盒
人抗胃壁細(xì)胞抗體(AGPAPCA)檢測(cè)試劑盒
人抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA)檢測(cè)試劑盒
人抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體(MCV)檢測(cè)試劑盒
人抗髓磷脂抗體IgA(AMAIgA)檢測(cè)試劑盒
人抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體(MCV)檢測(cè)試劑盒
人抗髓磷脂抗體IgA(AMAIgA)檢測(cè)試劑盒
人抗腮腺管抗體(anti-parotidductAb)檢測(cè)試劑盒
人抗軟骨抗體(anti-cartilage-Ab)檢測(cè)試劑盒
人抗抗體(AhCGAb)檢測(cè)試劑盒
人抗染色體抗體(anti-chromosomeAb)檢測(cè)試劑盒
人抗腦組織抗體(ABAb)檢測(cè)試劑盒
人抗麥膠蛋白麥醇溶蛋白抗體(AGA)檢測(cè)試劑盒
人抗磷脂酰抗體(APSA)檢測(cè)試劑盒
人抗磷壁酸抗體(TA)檢測(cè)試劑盒
人抗淋巴細(xì)胞毒抗體(ALALCA)檢測(cè)試劑盒
人抗巨噬細(xì)胞抗體(anti-macrophageAb)檢測(cè)試劑盒
人抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)檢測(cè)試劑盒
人抗紅細(xì)胞抗體(RBC)檢測(cè)試劑盒
人28S抗核糖體抗體(28SrRNP)檢測(cè)試劑盒
人抗核仁抗體(ANA)檢測(cè)試劑盒
人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)檢測(cè)試劑盒
人抗肝細(xì)胞胞質(zhì)1型抗體(LC1)檢測(cè)試劑盒
人抗肺泡基底膜抗體(ABM-Ab)檢測(cè)試劑盒
人抗胸腺細(xì)胞球蛋白(ATG)檢測(cè)試劑盒
人抗表皮細(xì)胞基底膜抗體(EBMZ)檢測(cè)試劑盒
人抗中性粒中心體抗體(ACA)檢測(cè)試劑盒
人抗白蛋白抗體(AAA)檢測(cè)試劑盒
人抗浦肯野細(xì)胞抗體抗Yo抗體(PCA-1Yo)檢測(cè)試劑盒
人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)檢測(cè)試劑盒
人抗神經(jīng)元核抗體2型抗Ri抗體(ANNA-2Ri)檢測(cè)試劑盒
人異質(zhì)型核糖核蛋白復(fù)合物抗RA33抗體(hnRNPRA33)檢測(cè)試劑盒
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