微量樣品基因組 DNA 提取試劑盒

（Micro DNA Kit）

For Research Use only

僅供研究用

貨號：QY312

20T/50T/100T

產品簡介：

本試劑盒采用可以特異性結合核酸的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)，樣品裂解后，DNA在高鹽條件下與硅膠膜結合，在低鹽、高pH值時DNA從硅膠膜上洗脫下來。

本試劑盒用于從小劑量的血液、干血點等微量樣品中提取基因組DNA，所得基因組DNA可直接用作PCR模板、酶切、雜交等分子生物學實驗。

儲存條件：置于室溫（15–25℃）干燥條件下，可保存 12 個月，更長時間的保存可置于 2–8℃。

注意事項：請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項

1. 樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。

2. 若緩沖液 A 或緩沖液 B 中有沉淀，可在 56℃水浴中重新溶解。

3. 所有的樣品使用前請平衡到室溫(15–25℃)。

4. 次使用試劑盒時，請按照試劑瓶上的提示在漂洗液 W2 中添加無水乙醇。

所有離心步驟均使用臺式離心機，室溫下離心。

一、從少量血中提取基因組 DNA 操作步驟：

1. 取 10–100 µl 血液到 1.5 ml 的離心管中。加緩沖液 A 到 100 µl 終體積。加入 10 µl 的蛋白酶 K 溶液。

注意：如果需要去除 RNA，可加入 5µl RNase A (100mg/ml) 溶液(目錄號：ZS103)，振蕩 15 秒，室溫放置 5 分鐘。

2. 加入 100 µl 的緩沖液 B 和 5ul Acryl Carrier，渦旋振蕩 1-3 秒，混勻即可。簡短離心以去除管蓋內壁的液滴。56℃溫浴 10 分鐘。

注意：加入緩沖液 B 時可能會產生白色沉淀，一般 56℃放置時會消失，不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不*，可能導致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不純。

• 加入 100 µl 乙醇（96–100%），如果室溫超過 25℃，請將乙醇置冰上預冷。渦旋振蕩 20 秒。簡短離心以去除管蓋內壁的液滴。將所得溶液都加到一個吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
• 向吸附柱中加入 500 µl 緩沖液 C，12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
• 向吸附柱中加入 600 µl  漂洗液 W2（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇）， 12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。重復此步聚一次。
• 將吸附柱放入收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 分鐘，倒掉廢液。將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘，以*晾干吸附材料中殘余的漂洗液

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應（酶切、PCR 等）實驗。

• 將吸附柱轉入一個干凈的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加 30–50 µl 洗脫緩沖液 TE， 室溫放置 2–5 分鐘，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 分鐘， 將溶液收集到離心管中。

注意：洗脫緩沖液體積不應少于 30 μl，體積過小影響回收效率。為增加基因組

DNA 的得率，可將離心得到的溶液再次加入吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，12,000

rpm(~13,400×g)離心 2 分鐘。

洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應保證其 pH 值在7.0-8.5 范圍內(可以用 NaOH 將水的 pH 值調到此范圍)，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率；且 DNA 產物應保存在-20℃，以防 DNA 降解。

二、從干血點中提取基因組 DNA 操作步驟：

1. 取三片 3×3 mm 的樣品到 1.5 ml 的離心管中。加入 180 µl 的緩沖液 A。加入10 µl 蛋白酶 K 溶液，輕輕顛倒混勻。56℃孵育 30 分鐘。

2 . 加入 200 µl 的緩沖液 B 和 5ul Acryl Carrier，渦旋振蕩 1-3 秒，混勻即可。

70℃孵育 10 分鐘，簡短離心以去除管蓋內壁的液滴。

注意：加入緩沖液 B 時可能會產生白色沉淀，一般 70℃放置時會消失，不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不*，可能導致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不純。

3. 加入 200 µl 的乙醇（96–100%）。如果室溫超過 25℃，請將乙醇置冰上預冷。渦旋振蕩 20 秒。簡短離心以去除管蓋內壁的液滴。

4. 將上一步所得溶液都加到一個吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12,000  rpm

(~13,400×g)離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

• 向吸附柱中加入 500 µl 緩沖液 C，12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中

• 向吸附柱中加入 700  µl  漂洗液 W2（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇）， 12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。重復此步聚一次。

7. 將吸附柱放回廢液收集管中，12,000 rpm (~13,400×g)離心 2 分鐘，倒掉廢液。將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘，以*晾干吸附材料中殘余的漂洗液。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應（酶切、PCR 等）實驗。

8. 將吸附柱轉入一個干凈的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加 30–50 µl 洗脫緩沖液 TE， 室溫放置 2–5 分鐘，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 分鐘，將溶液收集到離心管中。

注意：洗脫緩沖液體積不應少于 30 μl，體積過小影響回收效率。為增加基因組

DNA 的得率，可將離心得到的溶液再次加入吸附柱中，室溫放置2 分鐘，12,000

rpm(~13,400×g)離心 2 分鐘。

洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應保證其 pH 值在7.0-8.5 范圍內(可以用 NaOH 將水的 pH 值調到此范圍)，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率；且 DNA 產物應保存在-20℃，以防 DNA 降解。

DNA 濃度及純度檢測

得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。回收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。

DNA 應在 OD₂₆₀ 處有顯著吸收峰， OD₂₆₀ 值為 1 相當于大約 50 µg/ml 雙鏈

DNA、40 µg/ml 單鏈 DNA。

OD₂₆₀/OD₂₈₀ 比值應為 1.7-2.0 左右，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為 pH 值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。