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上海萬疆生物技術(shù)有限公司

萬疆生物誘變物質(zhì)的微核測試

時間:2014-8-30閱讀:228
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一、實驗原理
微核(micronuclei)簡稱(MCN)是真核類生物細胞中的一種異常結(jié)構(gòu),往往是細胞經(jīng)輻射或化學(xué)藥物的作用而產(chǎn)生的。在細胞間期,微核呈圓形或橢圓形,游離于主核之外、大小應(yīng)在主核1/3以下。微核的折光率及細胞化學(xué)反應(yīng)性質(zhì)和主核一樣,也具合成DNA的能力。一般認為微核是由有絲分裂后期喪失著絲粒的斷片產(chǎn)生的。我們科研工作證實,整條的染色體或好幾條也能形成微核。這些斷片或染色體在細胞分裂末期被兩個子細胞核所排斥便形成了第三個核塊。已經(jīng)證實微核率的大小是和用藥的劑量或輻射累積效應(yīng)呈正相關(guān),這一點和染色體畸變的情況一樣。所以許多人認為可用簡易的間期微核計數(shù)來代替繁雜的中期畸變?nèi)旧w計數(shù)。由于大量新的化合物的合成,原子能應(yīng)用,各種各樣工業(yè)廢物的排出,使人們很需要有一套高度靈敏,技術(shù)簡單的測試系統(tǒng)來監(jiān)視環(huán)境的變化。只有真核類的測試系統(tǒng)更能直接推測誘變物質(zhì)對人類或其它高等生物的遺傳危害,在這方面,微核測試是一種比較理想的方法。目前國內(nèi)外不少部門已把“微核測試用于輻射損傷、輻射防護、化學(xué)誘變劑、新藥試驗、染色體遺傳疾病及癌癥前期診斷等各方面。
現(xiàn)有的微核測試系統(tǒng)多數(shù)是用哺乳動物的骨髓細胞或外周血細胞。缺點是需要一定培養(yǎng)條件與時間、細胞同步化困難、微核率低,一般只在0.2%左右。近年來,有人采用高等植物花粉孢子利用它們天然的同步性作微核測試材料,取得良好的效果。其中馬德修用一種原產(chǎn)于美洲的鴨跖草(Tradescantiapaludosa)(一種葉子狹長形的鴨跖草,目前我國許多地方已經(jīng)引種),建立四分孢子期微核率計數(shù)(MCN-in-Tetrad)的測試系統(tǒng),是近年來報導(dǎo)的較好系統(tǒng)之一。該系統(tǒng)用低劑量的化學(xué)藥物處理或輻射處理,其微核率可達10%—67%。
二、實驗?zāi)康?br />1.是了解微核測定的方法與意義。
2.為尋找新的測試系統(tǒng)或測定更多的環(huán)境因素。
三、實驗材料
具有幼嫩花序的鴨跖草(長在溫室中的鴨跖草都能現(xiàn)蕾開花,大田栽培花期也很長),剪取花序,每種處理重復(fù)3根。
四、實驗器具和藥品
1.培養(yǎng)液:Knop氏培養(yǎng)液:1000ml蒸餾水+磷酸二氫鉀0.25g+*0.25g+硝酸鈣1.00g+硝酸鉀0.25g+微量磷酸鐵。
2.處理液:EMS(甲基磺酸乙酯),由培養(yǎng)液配成,50mmol/L,75mmol/L,100mmol/L,150mmol/L等各種處理濃度。NaN3(疊氮鈉),由培養(yǎng)液配成,0.2mmol/L0.4mmol/L,0.8mmol/L等各種濃度。
DES(硫酸二乙酯)由培養(yǎng)液配成50mmol/L,100mmol/L,150mmol/L等各種濃度。
3.固定液:3甲醇:1冰醋酸
染色:改良堿性品紅液(配法參看實驗二十八)
實驗用具:30ml三角燒瓶,剪刀,鑷子,載玻片,蓋玻片等。

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