方案優(yōu)勢

(一)為什么要進(jìn)行抗原修復(fù)? 組織在制作過程中，由于化學(xué)試劑的作用封閉了抗原，又由于熱的作用致使部分抗原的肽鏈發(fā)生扭曲，致使在免疫組化的染色過程中不能將其顯示出來，為了解決上述的問題，利用化學(xué)試劑和熱的作用將這些抗原重新暴露出來或修正過來的過程稱為抗原修復(fù)。 在免疫組化染色后的鏡下觀察中，有發(fā)現(xiàn)這樣的結(jié)果，陽性物反應(yīng)不強(qiáng)，時(shí)隱時(shí)現(xiàn)，表達(dá)不均勻，有時(shí)可出現(xiàn)假陰性，這是因?yàn)椋?1.組織在用甲醛固定的過程中所形成的醛鍵可封閉抗原的決定族。甲醛與組織蛋白質(zhì)類的反應(yīng)是多樣而復(fù)雜的，因?yàn)樗芎投喾N不同的功能基團(tuán)結(jié)合，在多數(shù)情況下在其間形成橋鍵8。這也是甲醛的一個(gè)作用，因?yàn)樗且环N聚合固定劑，因而能在相鄰的蛋白質(zhì)鍵間形成橋鍵的作用。 2. 甲醛在保存進(jìn)程中會(huì)形成羥甲基，也可封閉抗原決定族。據(jù)French和Edsall的研究認(rèn)為，zui常遇到的甲醇反應(yīng)，就是加到一個(gè)含反應(yīng)性氫原子的化合物中，形成一個(gè)羥甲基化合物。 3.在組織固定過程中，甲醛與蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)，形成醛交聯(lián)蛋白，這種化合物封閉了抗原，使之無法表達(dá)出來。 為了解決上述存在的問題，更好地暴露出抗原，將其很好地顯示出來，目前*的方法就是必須進(jìn)行抗原修復(fù)。 (二) 用什么方法進(jìn)行抗原修復(fù)? 至今為止，抗原修復(fù)有許多種方法，在這些方法中，有的是根據(jù)抗體的要求來進(jìn)行，有的是根據(jù)抗原的表達(dá)程度來進(jìn)行，我們則對(duì)每種病例每項(xiàng)檢測，都要求必須進(jìn)行抗原修復(fù)，以達(dá)到抗原全面表達(dá)的*狀態(tài)。 (1)物理化學(xué)試劑抗原修復(fù)法。 1. 真空負(fù)壓抗原修復(fù)法： ① 切片脫蠟至水。 ②0.3%H2O2甲醇真空負(fù)壓處理5分鐘。 ③自來水洗，蒸餾水洗。 ④0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH6.0)，真空負(fù)壓干燥箱預(yù)先調(diào)至95℃，真空負(fù)壓處理10分鐘。 ⑤待修復(fù)注降至室溫的一，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組化染色方法進(jìn)行染色。 2.微波輻射抗原修復(fù)法： ①切片脫蠟至水。 ②0.3%H2O2甲醇處理10分鐘。 ③自來水洗，蒸餾水洗。 ④ 0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH6.0)，于微波爐內(nèi)微波輻射10分鐘，如檢測Er和Pr則需要20輻射分鐘左右。 ⑤待修復(fù)液降至室溫后，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組織化學(xué)的染色方法進(jìn)行染色。 3.高壓抗原修復(fù)法： ①切片脫蠟至水。 ②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。 ③自來水洗，蒸餾水洗。 ④切片放入抗原修復(fù)液中，邊同容器放入高壓鍋中加熱至沸騰。蓋上壓力閥至噴汽后持續(xù)1-4分鐘。 ⑤待修復(fù)液恢復(fù)至室溫后，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組織化學(xué)染色方法進(jìn)行染色。 4.隔水熱抗原修復(fù)法： ①切片脫蠟至水。 ②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。 ③自來水洗，蒸餾水洗。 ④切片放入0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH0.6)中，邊同容器一起放入水溶鍋中加熱，其間應(yīng)不斷用溫度計(jì)測其溫度，待抗原修復(fù)液的溫度達(dá)到有效溫度后(92℃↑)。即開始計(jì)時(shí)，持續(xù)40分鐘。 ⑤待抗原修復(fù)液恢復(fù)至室溫后，PBS洗3次，隨后按選定好的免疫組化染色方法進(jìn)行染色。 5.電爐加熱抗原修復(fù)法： ①切片脫蠟至水。 ②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。 ③自來水洗，蒸餾水洗。 ④ 將切片放入抗原修復(fù)液中于電爐上加熱，不時(shí)用溫度計(jì)測量溫度，當(dāng)達(dá)92℃后，即可拔離電源，當(dāng)溫度低于92℃時(shí)，再插上電源，如此反復(fù)持續(xù)至10分鐘左右。 ⑤待抗原修復(fù)液降至室溫后，PBS洗3次，隨后按選定的免疫組化染色方法進(jìn)行染色。 對(duì)各種抗原修復(fù)方法的評(píng)價(jià)。