單克隆抗體(McAb)親和層析柱純化

重組人α干擾素作為一種具有廣譜抗病毒、抑制腫瘤細(xì)胞生長及免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子新型藥物，已在國內(nèi)外廣泛投入臨床應(yīng)用，并取得了顯著的療效。上對用于臨床的重組干擾素的純度要求很高，美國NIH規(guī)定必須在90％以上,因此生產(chǎn)者普遍采用親和層析純化法。我們研制了rHuIFN-α2a的McAb 3F1,與CNBr活化的Sepharose 4B交聯(lián)制成親和層析柱,經(jīng)1年60余次較大規(guī)模試用表明具有較理想的親和層析純化rHuIFN-α2a的性能，達(dá)到了國內(nèi)外同類McAb的水平。由于McAb 3F1也能和rHuIFN-α2b結(jié)合，故極有可能亦適用于rHuIFN-α2b的親和層析純化。 
 
一、性能指標(biāo) 
1. McAb的特性：IgG1,間接ELISA效價10-7,對rHuIFN-α2a具中和活性。 
2. 洗脫的rHuIFN-α2a純度：>90％。 
3. 洗脫的rHuIFN-α2a比活性：≥1×109IU/mg。 
4. rHuIFN-α2a的回收率：≥95％。 
5. 親和柱的穩(wěn)定性：4℃操作和保存情況下，使用60余次1年時間性能無明顯下降。 
6. 與國外McAb比較：各項(xiàng)指標(biāo)絕不亞于英國Celltech公司生產(chǎn)的McAb NK2。 
 
二、操作方法 
1. rHuIFN-α2a的粗提：表達(dá)rHuIFN-α2a的工程菌用鹽酸胍裂解，過DEAE凝膠柱粗提，收集活性峰。 
2. 親和層析：rHuIFN-α2a粗提物用pH7.2，0.15mol/L PBS透析過夜,上樣于經(jīng)pH7.2，0.15mol/L PBS平衡的親和層析柱，流速0.5ml/分,然后用大量PBS流洗至流出液OD280≤0.02,再用pH2.4,0.1mol/L甘氨酸-HC1洗脫,洗脫液立即轉(zhuǎn)至pH7.2，0.15mol/LPBS中透析過夜，測定蛋白濃度、純度和活性。 
 
三、保存方法 
1. 親和柱的再生：先后用10個柱床體積、含0.5mol/L NaCl的pH8.5,0.1mol/L Tris-HCl和pH4.5,0.1mol/L醋酸鈉緩沖液流洗親和柱，再用pH7.2,0.15mol/L PBS充分平衡。 
2. 貯存：加入1/萬的疊氮鈉防腐，貯存于4℃冰箱。