大鼠上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作中常見問題分析

由于大鼠上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)ELISA試劑盒具有靈敏度較高、特異性好的特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于各種傳染性疾病的篩查如肝炎、愛滋、優(yōu)生優(yōu)育等。雖然洗板只是ELISA實(shí)驗(yàn)重要環(huán)節(jié)中的一個(gè)，但作為專業(yè)的洗板機(jī)生產(chǎn)廠家，我們必須對(duì)影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果各因素有一定的認(rèn)識(shí)。的 試劑 ，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA 檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。如不注意，就易出現(xiàn)白板、花板、色弱和假陽性等現(xiàn)象。尤其是花板現(xiàn)象(就是空白、陰性、陽性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常，而標(biāo)本孔的OD值卻明顯偏高)是各個(gè)廠家洗板機(jī)調(diào)試中經(jīng)常遇到的問題。現(xiàn)將ELISA實(shí)驗(yàn)操作中注意事項(xiàng)總結(jié)如下，以期給大家?guī)硪恍﹩l(fā)，以改善洗板機(jī)的安裝調(diào)試水平，提高臨床檢測(cè)質(zhì)量。

大鼠上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)ELISA試劑盒標(biāo)本及采集、貯運(yùn)因素

嚴(yán)重溶血 ，以 HRP 為標(biāo)記的ELISA 測(cè)定中，殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性，催化底物顯色造成假陽性; 混有紅細(xì)胞的血清 易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈;如有 細(xì)菌污染 ，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng); 標(biāo)本凝固不全 ，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè)，常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果; 采血試管洗滌不* 、反復(fù)使用易交叉污染; 塑料試管能吸附抗原物質(zhì) ，樣本久置在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。

大鼠上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)ELISA試劑盒血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)，嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。一般說來，在 5 天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃，標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致血清IgG 聚合，使間接法的 試劑 本底加深。超過一周測(cè)定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測(cè)。反復(fù)凍融會(huì)使 抗體 效價(jià)跌落，所以測(cè) 抗體 的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè)，宜少量分裝冰存;使用一次性玻璃試管或真空管采血管;并使用非抗凝標(biāo)本，肝素抗凝血漿會(huì)增加OD值，可能與高濃度肝素具有強(qiáng)大的負(fù)電荷能吸附酶標(biāo)記物不易洗脫有關(guān);EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性;血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/span>

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