人舌癌細(xì)胞操作前打開紫外燈30-60分鐘，這個大家都知道。不過你別忘了還要在操作前至少10分鐘打開抽濾裝置來保證效果，但紫外消毒期間建議不要進(jìn)去一次特意打開抽濾裝置，可以與紫外燈一起打開，人舌癌細(xì)胞此時不需要抽濾開的過大就可以。（所謂的抽濾裝置就是就是那個風(fēng)機，就是吹風(fēng)超凈工作臺，不是過濾培養(yǎng)液的）!

細(xì)胞傳代培養(yǎng)（消化法）具體操作：

一：傳代前準(zhǔn)備；

1.預(yù)熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。

2.用75％酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。

3.正確擺放使用的器械：保證足夠的*作空間，不僅便于*作而且可減少污染。

4.點燃酒精燈：注意火焰不能太小。

5.準(zhǔn)備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶，放入微波爐內(nèi)高火，8分鐘再次消毒。

6.取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液：人舌癌細(xì)胞取出已經(jīng)預(yù)熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內(nèi)。

7.從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞：注意取出細(xì)胞時要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面，再在鏡下觀察細(xì)胞。

8.打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時要在酒精燈上燒口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出舊培養(yǎng)液，用PBS清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細(xì)胞，*消化溫度是37℃。

2. 人舌癌細(xì)胞 顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，表明此時細(xì)胞消化適度。

3.吸棄消化液加入培養(yǎng)液：棄去胰蛋白酶液，注意更換吸管，加入新鮮的培養(yǎng)液。

三：吹打分散細(xì)胞；

1.吹打制懸：用滴管將已經(jīng)消化細(xì)胞吹打成細(xì)胞懸液。

2.吸細(xì)胞懸液入離心管：將細(xì)胞懸液吸入10ml離心管中。

3.平衡離心：平衡后將離心管放入臺式離心機中，以1000轉(zhuǎn)/分鐘離心6-8分鐘。

4.棄上清液，加入新培養(yǎng)液：棄去上清液，加入2ml培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。

四：分裝稀釋細(xì)胞；

1.分裝：將細(xì)胞懸液吸出分裝至2-3個培養(yǎng)瓶中，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。

2.顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞量，必要是計數(shù)。注意密度過小會影響傳代細(xì)胞的生長，傳代細(xì)胞的密度應(yīng)該不低于5×105/ml。zui后要做好標(biāo)記。

五：繼續(xù)培養(yǎng)；

用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶，適當(dāng)旋松瓶蓋，放入CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。人舌癌細(xì)胞傳代細(xì)胞2小時后開始貼附在瓶壁上。當(dāng)生長細(xì)胞鋪展面積占培養(yǎng)瓶底面積25％時為一個＋，占50％為＋＋，占75％時為＋＋＋。  

XY0001    組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞,U-937細(xì)胞

XY0002    總T淋巴細(xì)胞,OKT3細(xì)胞

XY0003    紫色直絲鏈霉菌

XY0004    紫紅曲霉

XY0005    子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞,HEC-1-B細(xì)胞

XY0006    子宮內(nèi)膜癌 Ishikawa細(xì)胞

XY0007    子宮鱗癌細(xì)胞（高分化）HCC 94 [HCC941122]細(xì)胞

XY0008    子宮頸癌細(xì)胞,SiHa細(xì)胞

XY0009    轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞,AsPC-1細(xì)胞

XY0010    轉(zhuǎn)血小板基因倉鼠卵巢細(xì)胞,CHO-pt細(xì)胞

XY0011    轉(zhuǎn)入Tet-off調(diào)控，含EGFP基因的CHO細(xì)胞,CHO-AA8細(xì)胞

XY0012    轉(zhuǎn)染了tk基因的SW038-C2細(xì)胞,SW038-C2-tk細(xì)胞

XY0013    轉(zhuǎn)染了microRNA-mock基因的陰性對照細(xì)胞,Hela-mock細(xì)胞

XY0014    轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,3T3/Fas/com細(xì)胞

XY0015    轉(zhuǎn)基因鼻咽癌細(xì)胞系 CNE1-lmp\l細(xì)胞

XY0016    轉(zhuǎn)化的豚鼠胎體細(xì)胞,104C1細(xì)胞

XY0017    轉(zhuǎn)S9基因倉鼠卵巢細(xì)胞,ZA6細(xì)胞

XY0018    轉(zhuǎn)S9基因倉鼠卵巢細(xì)胞,ZA1細(xì)胞

XY0019    轉(zhuǎn)PYTL基因小鼠睪丸支持細(xì)胞,15P-1細(xì)胞

XY0020    轉(zhuǎn)HLA-2基因B細(xì)胞,T2細(xì)胞

XY0021    磚紅鏈霉菌

XY0022    豬腎細(xì)胞系 PK15細(xì)胞

XY0023    豬腎細(xì)胞系 PK13細(xì)胞

XY0024    豬腎細(xì)胞系 IBRS-2細(xì)胞

XY0025    豬腎細(xì)胞,PK-15細(xì)胞,

XY0026    豬腎細(xì)胞,LLC-PK1細(xì)胞

XY0027    豬腎上皮細(xì)胞,PK15-EGFP-puro細(xì)胞

XY0028    豬腎上皮細(xì)胞,PK（15）細(xì)胞

XY0029    豬腎近曲小管上皮細(xì)胞,LLC-PK1細(xì)胞

XY0030    豬髖動脈內(nèi)皮細(xì)胞,PIEC細(xì)胞,

XY0031    豬霍亂沙門氏菌豬霍亂亞種

XY0032    豬骨髓間質(zhì)干細(xì)胞,Pig MSC細(xì)胞

XY0033    豬睪丸細(xì)胞系 ST細(xì)胞

XY0034    豬肺泡巨噬細(xì)胞,3D4/21細(xì)胞

XY0035    豬鼻甲黏膜成纖維細(xì)胞,PT-K75細(xì)胞

XY0036    皺褶青霉

XY0037    中華根霉

XY0038    中國倉鼠體細(xì)胞,R 1610(細(xì)胞