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初級(jí)會(huì)員 | 第10年

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細(xì)胞庫(kù)

購(gòu)買(mǎi)細(xì)胞注意事項(xiàng)

時(shí)間:2014-12-8閱讀:2722
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一、若客戶(hù)收到T25培養(yǎng)瓶細(xì)胞
1、客戶(hù)收到細(xì)胞先不開(kāi)蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開(kāi)封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。 2、如為貼壁細(xì)胞,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度:a.未超過(guò)80%匯合度時(shí),用75%酒精(建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水)噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作;然后打開(kāi)蓋子,先用槍頭把培養(yǎng)基吸出10ml左右,放在離心管里,然后瓶口過(guò)火(嚴(yán)禁直接傾倒),這樣可以保證不污染,再用10ml的移液管,將剩余的培液全部吸出,放于離心管中,培養(yǎng)瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培養(yǎng)16hr(時(shí)間根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況調(diào)整)之后,傳代或者凍存。b.超過(guò)80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:1)棄去培養(yǎng)液,用3ml PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次;2)加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于T25培養(yǎng)瓶中,倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓分散,輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,細(xì)胞隨即脫落下來(lái);3)加入6-8ml*培養(yǎng)基,吸出,分到新的培養(yǎng)瓶中,按要求分瓶。    3、如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。注意:換液時(shí)一半用我們的培養(yǎng)基,一半用你們的,以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)不好。 
二、若客戶(hù)收到2ml小管細(xì)胞
收到細(xì)胞以后,用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作;然后將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶,加入9ml左右含F(xiàn)BS的培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞匯合度:若未超過(guò)80%匯合度,換液繼續(xù)培養(yǎng),根據(jù)情況傳代或者凍存。若超過(guò)80%匯合度,可直接進(jìn)行傳代(方法同上)。

 三、細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
(1)客戶(hù)造成細(xì)胞污染,不重發(fā);
(2)客戶(hù)不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(3)非ATCC推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(4)細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
(5)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
(6)細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
(7)視具體情況而定。
四、細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標(biāo)準(zhǔn)是什么?
(1)細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題,細(xì)胞丟失、破損、漏液等,重發(fā);
(2)凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,重發(fā);
(3)存活的細(xì)胞靜置24小時(shí)后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,重發(fā);
(4)凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后或存活的細(xì)胞靜置4小時(shí)后并且未開(kāi)封,出現(xiàn)污染,重發(fā);
(5)視具體情況而定。
五、售后服務(wù)政策
細(xì)胞污染問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時(shí)內(nèi),給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果;細(xì)胞活性問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們調(diào)查核實(shí)后予免費(fèi)調(diào)換,不收取任何費(fèi)用。
    需要客戶(hù)提供細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明、細(xì)胞操作處理方法、細(xì)胞質(zhì)量問(wèn)題反饋表;如果搞不清原因的,或者客戶(hù)直接愿意支付購(gòu)買(mǎi)價(jià)5.0折的費(fèi)用直接復(fù)蘇。

    如用戶(hù)收到細(xì)胞8-30天之內(nèi),因處理不當(dāng)造成細(xì)胞死亡或污染,我公司將以5.0折優(yōu)惠價(jià)重新提供一株原細(xì)胞
細(xì)胞活力狀態(tài)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力。

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