我國生物制品中殘余DNA檢測標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)
我國參照WHO、FDA和歐盟的標(biāo)準(zhǔn)，很早以前開始就對生物制品中殘余DNA的含量進行限制。酵母、大腸桿菌表達的生物制品限定不超過10ng/劑，CHO和vero細(xì)胞表達的EPO、狂犬疫苗、乙肝疫苗等不超過100或10pg/劑。2010年版中國藥典附錄收錄了DNA 探針雜交法和熒光染料法作為殘余DNA檢測方法。以斑點雜交法為代表的DNA雜交法因為操作復(fù)雜，耗時較長，且只能半定量，在2014年美國藥典修訂版征詢意見稿中（ PF40(2)）中已經(jīng)被剔除。以PicoGreen為代表的熒光染料法是基于熒光染料分子直接與雙鏈DNA結(jié)合后，經(jīng)帶有熒光檢測功能的酶標(biāo)儀激發(fā)后產(chǎn)生熒光信號，因為不能檢出單鏈DNA，且沒有序列特異性，以及靈敏度較低（>300pg）等原因，早已被歐美藥典摒棄。
我國2010版藥典及2015版藥典（附錄IX B 外源性 DNA 殘留量測定法）的征求意見稿中收載了的DNA探針雜交法和熒光染料法，而2009年美國USP就收錄了雜交法、閾值法和qPCR法，到2015年底USP將只收錄高靈敏度、高特異性的qPCR法作為殘留DNA檢測的推薦方法。由此可見qPCR法將成為*的殘留DNA檢測方法，也可能會是我國下一版藥典的主要修訂內(nèi)容。國內(nèi)生物制品研發(fā)與生產(chǎn)企業(yè)，以及生產(chǎn)純化填料的上下游企業(yè)，盡早建立以qPCR方法為基礎(chǔ)的宿主殘余DNA檢測體系，將有利于改進工藝、提高產(chǎn)品質(zhì)量，實現(xiàn)與歐美發(fā)達國家生物藥品標(biāo)準(zhǔn)的接軌。
