大鼠尿微量白蛋白（ALB）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：大鼠尿微量白蛋白（ALB）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿、或相關(guān)組織液中尿微量白蛋白（ALB）的含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠尿微量白蛋白（ALB）水平。用純化的大鼠尿微量白蛋白（ALB）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入尿微量白蛋白（ALB），再與HRP標(biāo)記的尿微量白蛋白（ALB）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的尿微量白蛋白（ALB）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準曲線計算樣品中大鼠尿微量白蛋白（ALB）的含量。

試劑盒組成 

標(biāo)本處理及要求 

1．血清、血漿標(biāo)本可直接測定；

2．尿液、腦脊液、腹腔液：2000-3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘后，取上清液待測。

3．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

4．采集后盡早進行實驗，若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

操作步驟

• 標(biāo)準品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上按序設(shè)標(biāo)準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)準品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準品稀釋液50μl，混勻；再各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準品稀釋液50μl，混勻后，在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉；再各取50μl分別加到第五、第六孔中；再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分別加標(biāo)準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（ 稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃 度分別為 150 ug/ml，100 ug/ml ，50 ug/ml，25 ug/ml，12.5 ug/ml）。
• 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，輕輕晃動混勻。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
• 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
• 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 
• 溫育：操作同3。
• 洗滌：操作同5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
• 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

計算

  以標(biāo)準物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準物的濃度與OD值計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

• 請每次測定的同時做標(biāo)準曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準品孔*孔OD值的），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
• 嚴格按說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準.

6．本試劑不同批號組分不得混用。

7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．底物請避光保存。

檢測范圍：

4 ug/ml -200 ug/ml

規(guī)格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月

acerun='s;?J(??#e:10.5000pt; font-family:'宋體'; " >

• 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
• 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
• 溫育：操作同3。
• 洗滌：操作同5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
• 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

注意事項：

• 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
• 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
• 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
• 請每次測定的同時做標(biāo)準曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
• 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
• 底物請避光保存。
• 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準.
• 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
• 本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

計算：

以標(biāo)準物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，    

在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準曲線，根據(jù)樣品的OD      

值由標(biāo)準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋      

倍數(shù)；或用標(biāo)準物的濃度與OD值計算出標(biāo)      

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值      

代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋      

倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。                  

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和15%

檢測范圍：                                              

2ng/L -40ng/L                                       

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月