牛β乳球蛋白(β-Lg)ELISA試劑盒
尊敬的客戶,感謝你選用本公司的產(chǎn)品。本產(chǎn)品適用于體外定量檢測牛血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液、組織等中天然和重組的β-Lg濃度。檢測其他特殊樣本請咨詢本公司。試劑盒僅供科研使用。 使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑盒組分。 如有疑問,請武漢新啟迪生物科技有限公司。 您將得到我們的服務(wù)。
本試劑盒采用雙抗體夾心法,雙抗體夾心原理,是基于要測試的抗原具有二價以上的特性,能識別包被抗體,同時能識別檢測抗體,具體過程如下:
- 將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體,洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì),并用無關(guān)蛋白封閉空余結(jié)合位點。
- 加受檢標本使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時間,讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合,形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。
- 加*標記抗體,使固相免疫復合物上的抗原與*標記抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的*標記抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。
- 加辣根過氧化物酶標記親和素,使*標記抗體與辣根過氧化物酶標記的親和素結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標記物。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。
- 加入底物顯色,即可計算標本濃度。
- 注:一個抗體分子上可以標記上若干個*分子,一個*分子可以結(jié)合一個辣根過氧化物酶標記的親和素,從而帶來了大量的辣根過氧化物酶結(jié)合到抗體上,比傳統(tǒng)的直接辣根過氧化物酶標記抗體具有更高的敏感性和放大效應(yīng)。
【牛β-Lg酶聯(lián)免疫試劑盒檢測原理】
本實驗采用雙抗體夾心ELISA法。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(ELISA)。預先包被的抗體為抗牛β-Lg單克隆抗體。檢測相抗體為多克隆抗體,經(jīng)*(biotin)標記。樣品和*標記抗體先后加入酶標板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應(yīng);經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。
【牛β-Lg酶聯(lián)免疫試劑盒檢測原理示意圖】
*步 第二部
第三步 第四步
【試劑盒組成】
名稱 96 Tests 48 Tests 保存條件
1.牛β-Lg抗體包被板條 8×12 8×6 4/-20℃
2.牛β-Lg標準品 2 支(凍干) 1 支(凍干) 4/-20℃
3.濃縮*化牛β-Lg抗體 1支 1 支 4/-20℃
4.濃縮酶結(jié)合物(ABC) 1支 1 支 4/-20℃
5. 酶結(jié)合物(ABC)稀釋液 1瓶 1瓶 4/-20℃
6.抗體稀釋液 1瓶 1 瓶 4/-20℃
7.標準品稀釋液 1瓶 1 瓶 4/-20℃
8.樣品稀釋液 1瓶 1 瓶 4/-20℃
9.濃縮洗滌液 1 瓶(25×) 1 瓶(25×) 4/-20℃
10.顯色劑A 1 瓶 1 瓶 (避光) 4/-20℃
11.顯色劑B 1 瓶 1 瓶 4/-20℃
12.終止液 1 瓶 1 瓶 4/-20℃
13.說明書 1 份 1 份 室溫
【試驗所需自備試驗設(shè)備和器材】
- 酶標儀(450nm檢測波長濾光片,570nm或630nm校正波長濾光片) 。
- 洗板機(可調(diào)注液量,保證每孔350μl洗液而不溢出)。
- 超凈工作臺,生物安全柜,通風柜。
- 高精度單道加液器(量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).
- 高精度多道加液器(8道或12道,量程為50-300μl).
- 37℃恒溫箱。
- 低溫離心機。
- 電冰箱(4℃,-20℃,-86℃).
- 分析天平。
- 剪刀,鑷子,鉗子等。
- 漩渦混合儀,低頻振蕩器等。
【試驗所需自備試驗耗材及試劑】
- 離心管(容量為1.5ml,5ml等)。
- 一次性吸頭(量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).
- 純凈水或蒸餾水。
- 坐標紙。
- 吸水紙。
- EDTA,*,肝素
【標本收集注意事項】
- 收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)毒素試管。
- 血清和血漿避免使用溶血,高血脂標本。
- 標本應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。
- 標本收集后若不及時檢測,需按一次使用量分裝,凍存于-20℃,-80℃電冰箱內(nèi),避免反復凍融。
- 可根據(jù)標本的實際情況,做適當倍數(shù)稀釋(建議做預實驗,以確定稀釋倍數(shù)) 。
- 收集標本,盡量做到雙份的用量,避免一次實驗失敗,重復實驗時標本缺失,從而耽誤實驗進程。
- 收集標本時,應(yīng)該做好防護措施(比如戴手套,口罩,護目鏡等),認為所有標本都具有一定的潛在危險性。
- 樣本處理應(yīng)該在生物安全柜里面,并且正確使用生物安全柜。
【標本處理辦法】
- 血清:將采集的全血靜置冰箱4℃過夜,然后1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
- 血漿:用EDTA,*,肝素等作為抗凝劑,加入血液混勻后,1000-3000rpm離
心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)
保存。
- 組織勻漿:切取組織塊,0.01MPBS中過洗一次;按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,在冰水中勻漿。勻漿完成后,5000-10000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
- 細胞培養(yǎng)上清:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
- 尿液,腹水,腦脊液等:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃3-6個月)保存。
注:樣品稀釋的一般原則
用戶須查閱相關(guān)文獻了解標本內(nèi)待測因子的含量,決定適當?shù)南♂尡稊?shù),以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的*檢測范圍。樣品的稀釋應(yīng)有詳細記錄。
【注意事項】
- 試劑盒使用前請保存在2-8℃。除復溶后的標準品,其他成分不可凍結(jié)。
- 濃縮*化牛β-Lg抗體,濃縮酶結(jié)合物體積小,運輸中顛簸和可能的倒置,會使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請用手甩幾下或1000rpm離心1分鐘,以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。
- 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液。
- 測試過程中,牛β-Lg凍干標準品為一次性使用,不得分裝。因其濃度較低,溶解兩小時候后,會迅速失活。
- 操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
- 配制試劑時,要用旋渦混合儀混勻。加入孔內(nèi)的試劑,充分混勻?qū)y試結(jié)果尤為重要,使用微量振蕩器(使用zui低頻率),如無微量振蕩器,可在反應(yīng)前手工輕輕晃動酶標板1分鐘,例如做圓周動作,使加入孔中的反應(yīng)液混勻。
- 實驗用酶標儀應(yīng)嚴格按使用說明書規(guī)范操作,并在使用前充分預熱。
- 酶免試驗中牛β-Lg標準品和樣本檢測時建議作復孔。
- 將不用的微孔板放進原鋁箔袋中,置2-8℃保存。
- 顯色液對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
- 超過使用有效日期的試劑盒不能應(yīng)用于實驗中。
- 試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,波長應(yīng)該設(shè)置為450nm和630nm.
- 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸,使用時必須注意安全。
- 各步驟加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校準其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,*使用排槍加樣。
- 每次試驗測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔zui高濃度的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n)。
- 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
- 以洗板機洗板時,每孔注液量不應(yīng)少于350μl, 注意檢查加樣頭是否堵塞。手工洗板時, 用帶紙屑的吸水材料應(yīng)慎重, 防止外源性過氧化物酶類似物或氧化還原物與顯色劑發(fā)生反應(yīng)。
- 用終止液終止反應(yīng)后,請于10分鐘內(nèi)讀取OD值。
- 進行復孔實驗時,結(jié)果計算一定要求平均值。
- 標本溶血可能會有假陽性結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
- 試驗時,應(yīng)該將加過樣品的板條放于密閉盒內(nèi),并保持濕度約60%左右。
- 為保證恒溫箱內(nèi)的溫度為37℃,恒溫箱的溫度要經(jīng)常校準。以確保實驗溫度保持恒定。
- 48T的試劑盒,所有組分均為96T的50%的量。
- 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
【檢測前準備工作】
1. 請?zhí)崆?/span>20分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫后方可進行試驗。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回 。
3. 牛β-Lg標準品: 加入標準品稀釋液1.0ml至凍干牛β-Lg標準品中,靜置10分鐘,待其充分溶解后,輕輕混勻(濃度為10 ng/ml),之后在管身標注①,然后根據(jù)需要進行稀釋。(建議標準曲線使用以下濃度:10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0.156 ng/ml)。 注意:務(wù)必要保證凍干標準品*溶解和混勻。
4. 標準品稀釋方法圖例: 取7支潔凈的試劑管,分別標注②,③,④,⑤,⑥,⑦,⑧. 每管加入300μl標準品稀釋液。從第①管內(nèi)取出300μl加入到第②管,混勻后,再從第②管取出300μl加入到第③管,以此類推至第⑦管。第⑧管為標準品稀釋液,作為陰性對照使用。