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上海遠(yuǎn)研生物科技有限公司

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大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)ELISA試劑盒

時間:2015/3/9閱讀:282
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大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供科研使用。

本試劑盒用于體外定量檢測大鼠血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)的含量。

有效期:6個月

保存條件:2-8

實驗原理

   本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)水平。用純化的大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT),再與HRP標(biāo)記的大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)濃度。

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1

1

R.T.

封板膜

2片(48

2片(96

R.T.

密封袋

1

1

R.T.

酶標(biāo)包被板

1×48

1×96

2-8保存

標(biāo)準(zhǔn)品:180pg/ml

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8保存

酶標(biāo)試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

顯色劑A液

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

顯色劑B液

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8保存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8保存


樣本處理及要求

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

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