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胰高血糖素樣肽2受體(GLP-2R)免疫分析豬說明書

時(shí)間:2014-2-26閱讀:364
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胰高血糖素樣肽2受體(GLP-2R)免疫分析豬說明書

用于測(cè)定豬血清,血漿及相關(guān)液體樣本中胰高血糖素樣肽2受體(GLP-2R)的含量。

試劑盒組成  

 48孔配置    96孔配置
說明書    1份    1份
封板膜    2片(48)    2片(96)
密封袋    1個(gè)    1個(gè)
酶標(biāo)包被板    1×48    1×96
標(biāo)準(zhǔn)品:540pg/ml    0.5ml×1瓶    0.5ml×1瓶
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液    1.5ml×1瓶    1.5ml×1瓶
酶標(biāo)試劑    3 ml×1瓶    6 ml×1瓶
樣品稀釋液    3 ml×1瓶    6 ml×1瓶
顯色劑A液    3 ml×1瓶    6 ml×1瓶
顯色劑B液    3 ml×1瓶    6 ml×1瓶
終止液    3ml×1瓶    6ml×1瓶
濃縮洗滌液    (20ml×20倍)×1瓶    (20ml×30倍)×1瓶

 

胰高血糖素樣肽2受體(GLP-2R)免疫分析豬說明書

樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.    標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為360 pg/ml,240 pg/ml,120 pg/ml,60 pg/ml, 30 pg/ml)。
2.    加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3.    溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.    配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5.    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.    加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7.    溫育:操作同3。
8.    洗滌:操作同5。
9.    顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
10.    終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.    測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。胰高血糖素樣肽2受體(GLP-2R)免疫分析豬說明書

胰高血糖素樣肽2受體(GLP-2R)免疫分析豬說明書廣銳生物匯集Elisa試劑盒(種屬標(biāo)本:人、大鼠、小鼠、兔子、雞、豬、牛、豚鼠、犬、馬、猴、羊、各類植物等等)、標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品、抗體、培養(yǎng)基、試劑為一體的科研產(chǎn)品供應(yīng)商,國內(nèi)各省市地區(qū),擁有雄厚的實(shí)力、合理的價(jià)格和優(yōu)良的技術(shù)服務(wù),能夠及時(shí)解決和滿足客戶的各方面的需求,是國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室及國內(nèi)各大院校長(zhǎng)期供應(yīng)商:  136 7159 7285/136 5172 1751

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