小鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA Kit

標本的稀釋原則： 
    首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標準曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。zui后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。 
    標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。 
    如配制150 pg/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。 
    *標記抗體的稀釋原則： 
    臨用前以*標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl*標記抗體加990μl*標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。 
    辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則： 
    臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。 
    操作注意事項： 
    ● 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。 
    ● 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。 
    ● 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。 
    ● 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。 
    ● 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。 
    ● 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。 
    ● 加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。 
    ● 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。 
    試劑盒組成 
    130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶 
    2酶標試劑6ml×1瓶8標準品（16ng/L）0.5ml×1瓶 
    3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶 
    4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份 
    5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張 
    6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個 
    標本要求 
    1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
    2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性
檢測方法：酶聯(lián)免疫法/酶免法（ELISA） 
    操作注意事項 
    1． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。 
    2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。 
    3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。 
    4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。 
    5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品 
    6． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。 
    7． 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。 
    8． 加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。 
    9． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,
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