導(dǎo)讀:ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三分必要的試劑:固相的抗原或抗體,即“免疫吸附劑”(immunosorbent);酶標(biāo)記的抗原或抗體,稱為“酶連物”、“結(jié)合物”(conjugate);酶反應(yīng)的底物。 根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的情況以及檢測的具體條件,可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測方法。絕大多數(shù)ELISA使用以下幾種策略:
1.間接ELISA(IndirecISA):用于篩檢抗體(抗特定抗原成分的特異性抗體)。此法是測定抗體zui常用的方法。
2.夾心ELISA(SandwichELISA):用于檢測目的抗原的量。其優(yōu)點(diǎn)是避免了對(duì)特異性抗體的直接標(biāo)記,但增加了操作步驟和測定時(shí)間。
3.競爭ELISA(CompetitiveELISA):用于確定抗原特異性或待檢標(biāo)本中含交叉反應(yīng)成分時(shí)為了提高實(shí)驗(yàn)的特異性而使用的一種方法。根據(jù)標(biāo)記抗原與同種未標(biāo)記待測抗原與抗體間發(fā)生競爭性結(jié)合的原理,主要用于測定小分子抗原。
4.ABS-ELISA法,ABS為親和素(avidin)*(biotin)系統(tǒng)(system)的略語。親和素是一種糖蛋白,分子量60000,每個(gè)分子由4個(gè)能和*結(jié)合的亞基組成。
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。
在測定時(shí),受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。
再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。
加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達(dá)到很高的靈敏度。