一、原理

在pH8.6的瓊脂凝膠中，抗體球蛋白只帶有微弱的負電荷，在電泳時，由于電滲作用的影響，抗體球蛋白不但不能抵抗電滲作用向正極移動，反而向負極倒退。而一般抗原蛋白質(zhì)帶負電荷，將抗原置于負極，將血清抗體置于正極，電泳后則在兩孔之間相遇，并在比例適當?shù)牟课恍纬扇庋劭梢姷某恋砭€。

本法由于抗原抗體分子在電場作用下定向運動，限制了自由擴散，增加了相應作用的抗原抗體的濃度，從而提高了敏感性，它較瓊脂擴散敏感性高10～16倍。本法快速、操作簡單。

二、試劑

同免疫電泳。

三、操作方法

1．制瓊脂板 以pH8.6離子強度0.05*緩沖液配成1%～1.5%瓊脂凝膠板，厚度2mm～3mm。

2．打孔 瓊脂冷卻后，按圖打孔，打成對的小孔數(shù)列，孔徑0.3cm～0.6cm，孔距0.4cm～1.0cm。挑去孔內(nèi)瓊脂，封底。

3．加樣 一對孔中，一孔加已知（或待測）抗原，另一孔加待測（或已知）抗體。

4．電泳 將抗原孔置于負。電壓2.5V/cm～6V/cm，或電流強度3mA/cm～5mA/cm，電泳時間30min～90min。

四、觀察結(jié)果

斷電后，將玻板置于燈光下，襯以黑色背景觀察。陽性者則在抗原抗體孔之間形成一條清楚致密的白色沉淀線。如沉淀線不清晰，可把瓊脂板放在濕盒中37℃數(shù)小時或置電泳槽過夜再觀察。

五、注意事項

1．抗原抗體濃度的比例 當抗原抗體比例不適合時，均不能出現(xiàn)明顯可見的沉淀線。所以除了應用價的血清外，每份待測樣品均可做幾個不同的稀釋度來進行檢查。

2．特異性對照鑒定 為了排除假陽性反應，則在待檢抗原孔的鄰近并列一陽性抗原孔，若待檢樣品中的抗原與抗體所形成的沉淀線和陽性抗原抗體沉淀線*融合時，則待檢樣品中所含的抗原為特異性抗原。

3．適當?shù)碾姖B作用在對流免疫電泳中是必要的。當瓊脂質(zhì)量差時，電滲作用太大，而使血清中的其它蛋白成分也泳向負極，造成非特異性反應。在某些情況，瓊脂糖由于缺乏電滲作用而不能用于對流免疫電泳。

4．當抗原抗體在同一介質(zhì)中帶同樣電荷或遷徙相近時，則電泳時兩者向著一個方向泳動。故不能用對流免疫電泳來檢查。上海友騰生物傾力為客戶提供上萬種科研試劑，提供*、zui全、zui有效的科研試劑產(chǎn)品，質(zhì)量被全國各大院校科研機構(gòu)認可。
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