1、1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)
□組份濃度1MTris-HCl
□配制量1L
□配置方法1.稱量121.1gTris置于1L燒杯中。
2.加入約800mL的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?br />
3.按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。
pH值濃HCl
7.4約70mL
7.6約60mL
8.0約42mL
4.將溶解定容至1L。
5.高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值,因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。
2、1.5MTris-HCl(pH8.8)
□組份濃度1.5MTris-HCl
□配制量1L
□配置方法1.稱取181.7gTris置于1L燒杯中。
2.加入約800mL的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?br />
3.用濃鹽酸調(diào)pH值至8.8。
4.將溶液定容至1L。
5.高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值,因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。
3、10×TEBuffer(pH7.4,7.6,8.0)
□組份濃度100mMTris-HCl,10mMEDTA
□配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液,置于1L燒杯中。
1MTris-HClBuffer(pH7.4,7.6,8.0)100mL
500mMEDTA(pH8.0)20mL
2.向燒杯中加入約800mL的去離子水,均勻混合。
3.將溶液定至1L后,高溫高壓滅菌。
4.室溫保存。
4、3M醋酸鈉(pH5.2)
□組份濃度3M醋酸鈉
□配制量100mL
□配置方法1.稱取40.8gNaOAc•3H2O置于100~200mL燒杯中,加入約40mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?br />
2.加入冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2。
3.加入去離子水將溶液定容至100mL。
4.高溫高壓滅菌后,室溫保存。
5、PBSBuffer
□組份濃度137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4
□配制量1L
□配置方法1.稱量下列試劑,置于1L燒杯中。
NaCl8g
KCl0.2g
Na2HPO41.42g
KH2PO40.27g
2.向燒杯中加入約800mL的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?br />
3.滴加HCl將pH值調(diào)節(jié)至7.4,然后加入去離子水將溶液定容至1L。
4.高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:上述PBSBuffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子,如需要,可在配方中補(bǔ)充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。
6、10M醋酸銨
□組份濃度10M醋酸銨
□配制量100mL
□配置方法1.稱量77.1g醋酸銨置于100~200mL燒杯中,加入約30mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?br />
2.加去離子水將溶液定容至100mL。
3.使用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌。
4.密封瓶口于室溫保存。
注意:醋酸銨受熱易分解,所以不能高溫高壓滅菌。
7、Tris-HCl平衡*
□配置方法
1.使用原料:大多數(shù)市售液化*是清亮無(wú)色的,無(wú)需重蒸餾便可用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。但有些液化*呈粉紅色或黃色,應(yīng)避免使用。同時(shí)也應(yīng)避免使用結(jié)晶*,結(jié)晶*必須在160℃對(duì)其進(jìn)行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物,這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此,*的質(zhì)量對(duì)DNA、RNA的提取極為重要,我們推薦使用高質(zhì)量的*進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
2.操作注意:*腐蝕性*,并可引起嚴(yán)重灼傷,操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡等。所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行,與*接觸過(guò)的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗,并用肥皂和水洗滌,忌用乙醇。
3.*平衡:因?yàn)樵谒嵝詐H條件下DNA分配于有機(jī)相,因此使用*前必須對(duì)*進(jìn)行平衡使其pH值達(dá)到7.8以上,*平衡操作方法如下:
?、僖夯?應(yīng)貯存于-20℃,此時(shí)的*呈現(xiàn)結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的*首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫,然后在68℃水浴中使*充分溶解。
?、诩尤肓u基喹啉(8-Quinolinol)至終濃度0.1%。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不*抑制劑及金屬離子的弱螯合劑,同時(shí)因其呈黃色。有助于方便識(shí)別有機(jī)相。
?、奂尤氲润w積的1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,靜置使其充分分層后,除去上層水相。
④重復(fù)操作步驟③。
?、菁尤氲润w積的0.1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,靜置使其充分分層后,除去上層水相。
?、拗貜?fù)操作步驟⑤,稍微殘留部分上層水相。
⑦使用pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的pH值大于7.8。
⑧將*置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
13、20%(W/V)Glucose
□組份濃度20%(W/V)Glucose
□配制量100mL
□配置方法1.稱取20gGlucose置于100~200mL燒杯中,加入約80mL的去離子水后,攪拌溶解。
2.加去離子水將溶液定容至100mL。
3.高溫高壓滅菌后,4℃保存。
14、SolutionI(質(zhì)粒提取用)
□組份濃度25mMTris-HCl(pH8.0),10mMEDTA,50mMGlucose
□配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液,置于1L燒杯中。
1MTris-HCl(pH8.0)25mL
0.5MEDTA(pH8.0)20mL
20%Glucose(1.11M)45mL
dH2O910mL
2.高溫高壓滅菌后,4℃保存。
3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA(20mg/mL)。
15、SolutionII(質(zhì)粒提取用)
□組份濃度250mMNaOH,1%(W/V)SDS
□配制量500mL
□配置方法1.量取下列溶液置于500mL燒杯中。
10%SDS50mL
2NNaOH50mL
2.加滅菌水定容至500mL,充分混勻。
3.室溫保存。此溶液保存時(shí)間不要超過(guò)一個(gè)月。
注意:SDS易產(chǎn)生氣泡,不要?jiǎng)×覕嚢琛?br />
16、SolutionIII(質(zhì)粒提取用)
□組份濃度3MKOAc,5MCH3COOH
□配制量500mL
□配置方法1.量取下列溶液置于500mL燒杯中。
KOAc147g
CH3COOH57.5mL
2.加入300mL去離子水后攪拌溶解。
3.加去離子水將溶液定容至500mL。
4.高溫高壓滅菌后,4℃保存。
17、0.5MEDTA(pH8.0)
□組份濃度0.5MEDTA
□配制量1L
□配置方法1.稱取186.1gNa2EDTA•2H2O,置于1L燒杯中。
2.加入約800mL的去離子水,充分?jǐn)嚢琛?br />
3.用NaOH調(diào)節(jié)pH值值8.0(約20gNaOH)。
注意:pH值至8.0時(shí),EDTA才能*溶解。
4.加去離子水將溶液定容至1L。
5.適量分成小份后,高溫高壓滅菌。
6.室溫保存。
18、1MDTT
□組份濃度1MDTT
□配制量20mL
□配置方法1.稱取3.09gDTT,加入到50mL塑料離心管內(nèi)。
2.加20mL的0.01M的NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22μm濾器過(guò)濾除菌。
3.適量分成小份后,-20℃保存。
19、10mMATP
□組份濃度10mMATP
□配制量20mL
□配置方法1.稱取121mgNa2ATP•3H2O,加入到50mL塑料離心管內(nèi)。
2.加20mL的25mMTris-HCl(pH8.0),攪拌溶解。
3.適量分成小份,-20℃保存。
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