AL107 糧食農(nóng)yao速測(cè)卡

1、原理

丁酰膽堿酯酶對(duì)有機(jī)磷農(nóng)yao高度敏感，根據(jù)酶活性的抑制情況就可以檢測(cè)到微量的農(nóng)yao殘留。丁酰膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯（紅色）水解為乙酸與靛酚（藍(lán)色），有機(jī)磷類農(nóng)yao對(duì)丁酰膽堿酯酶有抑制作用，使催化、水解、變色的過(guò)程發(fā)生改變，由此可判斷出樣品中是否有過(guò)量有機(jī)磷類農(nóng)yao的存在。

含硫類有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑是糧食生產(chǎn)中比較常用的農(nóng)yao，多數(shù)毒性較高。采用溴制劑（農(nóng)殘速測(cè)增強(qiáng)劑）對(duì)糧食樣品提取液進(jìn)行氧化前處理，可以顯著降低這類農(nóng)yao的檢出限，提高丁酰膽堿酯酶對(duì)這類農(nóng)yao的檢測(cè)靈敏度。

2、試劑

2.1糧食農(nóng)yao速測(cè)卡：固化有丁酰膽堿酯酶和靛酚乙酸酯顯色劑的酶試紙（簡(jiǎn)稱速測(cè)卡）。

2.2pH 7.8磷酸緩沖液：隨產(chǎn)品附送,每包用1000 mL純化水溶解。

2.3農(nóng)殘速測(cè)增強(qiáng)劑（溴制劑）：隨產(chǎn)品附送。

3、儀器

3.1農(nóng)yao殘留速測(cè)儀。

3.2樣品粉碎機(jī)。

3.3礱谷機(jī)。

3.4電子天平（0.1 g）。

3.5超聲波清洗儀。

3.6低速離心機(jī)。

3.7可調(diào)移液器（10～100 μL，1～5 mL）。

4、分析步驟

4.1樣品處理

4.1.1把糧食樣品粉碎至95%以上通過(guò)20目篩（稻谷應(yīng)先脫殼），稱取10 g樣品，倒入提取瓶，加入30 mL pH 7.8的磷酸緩沖液混勻。

4.1.2用超聲波清洗儀超聲5 min，待溶液分層后取上層提取液2 mL于試管內(nèi)，4000 r/min離心1 min；取1 mL上清液，加入50 μL農(nóng)殘速測(cè)增強(qiáng)劑，備用。

4.2檢測(cè)過(guò)程

4.2.1將農(nóng)yao殘留速測(cè)儀接通電源，開(kāi)機(jī)預(yù)熱，溫度達(dá)到40℃后，設(shè)定預(yù)反應(yīng)時(shí)間為10min，顯色時(shí)間為3min。

4.2.2取出糧食農(nóng)yao速測(cè)卡，先對(duì)折一下形成折痕，然后插入農(nóng)yao殘留速測(cè)儀的卡槽中（白片在下，紅片在上）。先取80 μL pH 7.8磷酸緩沖液加到空白對(duì)照卡的白色yao片上，然后依次取80 μL糧食樣品提取液分別加到其余的白色yao片上，按下開(kāi)始鍵，預(yù)反應(yīng)10 min。

4.2.3聽(tīng)到鳴音提示后將農(nóng)yao殘留速測(cè)儀上蓋合下來(lái)，使白色yao片和紅色yao片充分接觸，發(fā)生顯色反應(yīng)3min。

4.2.4再次聽(tīng)到鳴音提示后將農(nóng)yao殘留速測(cè)儀上蓋打開(kāi)，觀察顯色反應(yīng)的結(jié)果，以空白對(duì)照卡所顯藍(lán)色作為標(biāo)準(zhǔn)，判斷糧食樣品的檢驗(yàn)結(jié)果。

4.2.5如果沒(méi)有條件配置農(nóng)yao殘留速測(cè)儀，也可以直接用手代替儀器進(jìn)行檢測(cè)，放置10 min預(yù)反應(yīng)后，用手對(duì)折捏3 min，打開(kāi)觀察結(jié)果。用手操作，容易受環(huán)境溫度和各人手溫影響。

5、結(jié)果判定

結(jié)果以丁酰膽堿酯酶被有機(jī)磷類農(nóng)yao抑制（為陽(yáng)性）、未抑制（為陰性）表示。

與空白對(duì)照卡比較，糧食樣品速測(cè)卡的白色yao片不變色或略有淺藍(lán)色均為陽(yáng)性結(jié)果。

對(duì)測(cè)定結(jié)果為陽(yáng)性的樣品，應(yīng)重復(fù)檢驗(yàn)2～3次，進(jìn)一步通過(guò)其他分析方法確定具體農(nóng)yao種類和含量。

如果空白對(duì)照卡沒(méi)有顯示藍(lán)色，說(shuō)明檢測(cè)不正常，可能是速測(cè)卡失效或者環(huán)境中有相關(guān)農(nóng)yao和干擾物質(zhì)存在，或者是加樣的量不夠，需要排除有關(guān)問(wèn)題后再進(jìn)行檢測(cè)。

6、附則

6.1糧食農(nóng)yao速測(cè)卡技術(shù)指標(biāo)

6.1.1靈敏度指標(biāo)：糧食速測(cè)卡對(duì)部分農(nóng)yao的檢出限見(jiàn)表1。

表1 部分農(nóng)yao的檢出限

6.1.2符合率：檢出的30份以上陽(yáng)性樣品中，經(jīng)氣相色譜法等方法確證，陽(yáng)性結(jié)果的符合率應(yīng)達(dá)到80%以上。

7說(shuō)明

7.1丁酰膽堿酯酶速測(cè)卡對(duì)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)yao非常敏感，測(cè)定時(shí)如果附近噴灑農(nóng)yao或使用衛(wèi)生殺蟲(chóng)劑，以及操作者或器具沾有微量農(nóng)yao，都會(huì)造成對(duì)照和測(cè)定yao片不變藍(lán)。

7.2紅色yao片與白色yao片疊合反應(yīng)的時(shí)間以3min為準(zhǔn)，3min后藍(lán)色會(huì)逐漸加深，24h后顏色會(huì)逐漸褪去。

7.3農(nóng)殘速測(cè)增強(qiáng)劑具有腐蝕性、刺激性和揮發(fā)性，使用過(guò)程中要注意及時(shí)擰緊瓶蓋。

AL107 糧食農(nóng)yao速測(cè)卡