本試劑盒僅供研究使用。
使用目的：
本試劑盒用于測定豬血清，血漿及相關(guān)液體樣本中弓形蟲 (Tox)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用間接法測定標本中人弓形蟲 (Tox)水平。用純化的豬弓形蟲 (Tox)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的弓形蟲 (Tox)標準品和未知濃度的弓形蟲 (Tox)待檢樣品，溫育后，加入*標記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的弓形蟲 (Tox)抗體呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中豬弓形蟲 (Tox)濃度。
試劑盒組成
1 | 20倍濃縮洗滌液 | 50ml×1瓶 | 9 | 標準品S1（16U/L） | 0.5ml×1瓶 |
2 | 鏈霉親和素-HRP | 6ml×1瓶 | 標準品S2（8U/L） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 標準品S3（4U/L） | 0.5ml×1瓶 |
4 | *標記的抗-IgG抗體 | 6ml×1瓶 | 標準品S4（2U/L） | 0.5ml×1瓶 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 標準品S5（1U/L） | 0.5ml×1瓶 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 10 | 密封袋 | 1個 |
7 | 終止液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 3張 |
8 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 12 | 說明書 | 1份 |
標本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作步驟
- 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
- 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl，在樣本反應(yīng)孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為5倍），蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
- 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
- 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)4次，拍干。
- 加*標記的抗-IgG抗體：每孔加入*標記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘
- 洗滌：操作同4。
- 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
- 洗滌：操作同4。
- 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
- 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
