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ELISA實驗中樣本的收集方法

閱讀:516發(fā)布時間:2018-11-16

    在收集標本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。新鮮標本應盡早檢測,對收集后當天就進行檢測的標本,應及時儲存在4℃?zhèn)溆?。如因特殊原因需要定期、多次收集標本,請取材后,將標本及時分裝后放在-20℃或以下條件下保存。由于蛋白樣品多不穩(wěn)定,極易降解,應避免反復凍融,以減少對實驗的影響。今天我們和大家分享ELISA實驗中樣本的收集方法:

一、液體類標本,液體類標本包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。

1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

3.尿液:用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(pH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

二、組織標本:采集標本后,稱取組織凈重,用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后要保存?-8℃的溫度,加入一定量的PBS(pH7.2-7.4),用手工或電動勻漿器將標本充分勻漿。4℃離心(10000-15000轉/分)10-20分鐘。收集上清,留取適量檢測,其余冷凍保存?zhèn)溆谩?

備注:如果樣本中的待檢物需要提純,請客戶自行處理。


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