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技術(shù)文章

ELISA檢測(cè)抗多肽反應(yīng)

閱讀：745發(fā)布時(shí)間：2018-8-17

    檢測(cè)抗多肽反應(yīng)是否發(fā)生的簡(jiǎn)單方法就是抗多肽ELISA。有兩種技術(shù)可以將多肽鏈接到ELISA板上。

    方法一、就是直接將多肽鏈接到盤上。但如果鏈接氨基酸恰好是抗原決定簇的一部分，則抗體無(wú)法和多肽進(jìn)一步鏈接，這樣產(chǎn)生假陰性結(jié)果的可能性增加。

    方法二、則是先將多肽與載體蛋白耦合，然后將多肽－蛋白 耦合體鏈接到ELISA盤上。這種鏈接方法會(huì)使抗體－多肽的結(jié)合成功率提高，因?yàn)槎嚯牟皇侵苯忧度氡P膜，因而會(huì)更加暴露給抗體。這種方法因而更可靠，可重復(fù)性更高。需要注意的是，用于該方法的載體蛋白必須不同于用于免疫耦合的載體蛋白。這樣會(huì)避免血清中抗載體蛋白反應(yīng)所導(dǎo)致的高背景反應(yīng)。  

    當(dāng)做血清檢測(cè)時(shí)，另一點(diǎn)需要記住的是，由于免疫多肽與自然多肽結(jié)構(gòu)上的差別，檢測(cè)時(shí)的抗多肽反應(yīng)與試劑的抗多肽反應(yīng)可能是不同的。任何檢測(cè)，尤其是測(cè)定滴定量以決定收獲點(diǎn)時(shí)，必須包括針對(duì)天然狀態(tài)下蛋白的檢測(cè)。當(dāng)然可以做針對(duì)天然狀態(tài)下蛋白的ELISA；但由于血清在不同檢測(cè)體系中表現(xiàn)會(huì)不一樣，因此在血清被日常使用的體系中進(jìn)行蛋白識(shí)別鑒定。如果血清將用于免疫沉淀反應(yīng)，就應(yīng)該進(jìn)行針對(duì)該反應(yīng)的檢測(cè)。

    


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