常有ELISA實驗操作者抱怨實驗復(fù)雜，而經(jīng)驗豐富的老師們會覺得很簡便，一是熟能生巧，二是掌握了其中的秘密。今天為大家介紹ELISA試劑盒的操作秘密吧：
一、 ELISA試劑盒操作秘密重點之加樣：
在ELISA試劑盒中除了包被外，一般需進行45加樣。在定性測定中有時不強調(diào)加樣量的準(zhǔn)確性，此時應(yīng)該使用相同口徑的滴管，保持準(zhǔn)確的加樣姿勢，使每滴液體的體積基本相同。在定量測定中則加樣量應(yīng)力求準(zhǔn)確。標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液應(yīng)按規(guī)定配制。加樣時應(yīng)將液體加在孔底，避免加在孔壁上部，并注意不可出現(xiàn)氣泡。
二、ELISA試劑盒操作秘密重點之保溫：
在ELISA試劑盒中一般有二次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，此時反應(yīng)的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定的要求，保溫容器zui*是水浴箱，可使溫度迅速平衡。各ELISA板不應(yīng)疊在一起。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的濕盒中。濕盒應(yīng)該是金屬的，傳熱容易。
三、ELISA試劑盒操作秘密重點之洗滌：
洗滌在ELISA試劑盒過程中不是反應(yīng)聚，但卻是決定實驗成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。洗滌如不*，特別在zui后一次，如有酶結(jié)合物的非特異性吸附，將使空白值升高。另外，在間接法中如血清標(biāo)本內(nèi)的非特異性IgG吸附在固相上而未被洗凈，也將與酶標(biāo)抗體作用而產(chǎn)生干擾。
