看似簡單的ELISA實(shí)驗(yàn)在操作過程中稍有不合理的地方，會造成很多問題，影響檢測精度，降低測試質(zhì)量。如花板，假陽性，全彩色，全彩色，顏色空間的低等問題，這就要求我們在實(shí)驗(yàn)過程多做總結(jié)，逐步完善，篩選ELISA實(shí)驗(yàn)各項(xiàng)步驟中的重點(diǎn)之重。
*：包衣液的選擇
碳酸鹽緩沖液通常選擇9。6。但有時(shí)因?yàn)闇y試需求，數(shù)據(jù)包緩沖溶液是一種特殊的原料可采用中性包裝。應(yīng)注意以下原則：蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合，取決于在固相的疏水性基團(tuán)和疏水性相互作用的載體表面蛋白分子的結(jié)構(gòu)，物理吸附是非特異性的，蛋白分子量，等電點(diǎn)，大集中，小分子蛋白蛋白質(zhì)通常含有疏水基團(tuán)越多，所以更容易吸附在固相載體表面。測試也有很強(qiáng)的理論于實(shí)踐，看zui后一個(gè)可以應(yīng)用到我們的測試。除了剛才提到的9。6碳酸鹽緩沖液常用的涂料溶液，和磷酸鹽緩沖液和7-8 7。2 -緩沖。
第二：關(guān)閉
以下包之后是無關(guān)的蛋白質(zhì)溶液濃度高，涂層工藝。隨函附上使大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，和干擾物質(zhì)的免疫排斥和吸附步驟。ELISA試劑盒常用的密封：0。05% - 0。5%牛血清白蛋白；10%或1%明膠牛血清；脫脂奶粉，價(jià)格相對低廉，可用于高濃度(5%～10%)；和一些罕見的使用各種動物血清(主要是為了消除類似的蛋白和酪蛋白等干擾)。但到底選擇什么，根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體實(shí)踐。
第三：洗板
可以說，在中操作，清洗是在主要的關(guān)鍵技術(shù)。由于聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍存在的，為了實(shí)現(xiàn)自由酶與客觀相結(jié)合的標(biāo)記的分離，在板料孔中殘留游離和吸附的非特異性干擾物質(zhì)的去除，洗滌，并應(yīng)將干擾物質(zhì)洗滌下來的非特異性吸附。所以在洗衣板會有一定的誤差，非常人的因素(當(dāng)然也有洗衣機(jī)除條件)，是不完整的或弦清孔，系統(tǒng)的影響是如此敏感，但不小。
第四：加抗體(抗標(biāo)本和兩個(gè))
注意的槍頭，樣品用稀釋稀釋，也可以用稀釋的閉解。如果要添加兩個(gè)電阻，但也要注意兩個(gè)反工作濃度的廢物，太高，太低的光的顏色。
會員1.png)