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技術(shù)文章

簡易且能避免污染的細(xì)胞培養(yǎng)方法

閱讀:508發(fā)布時(shí)間:2017-9-25

    培養(yǎng)細(xì)胞常規(guī)方法需用二氧化碳溫箱,且為保持箱內(nèi)二氧化碳?xì)?%~10%的濃度,需持續(xù)輸入二氧化碳?xì)怏w。為此,箱內(nèi)的培養(yǎng)瓶蓋不能擰緊以便二氧化碳?xì)怏w自由進(jìn)出。

    *步,配制1L培養(yǎng)液。培養(yǎng)基中含有酚紅指示劑,偏堿時(shí)液體為深紅或紫色,偏酸時(shí)則呈黃色。取配1L培養(yǎng)液的粉劑培養(yǎng)基,加入750ml三蒸水或去離子水,搖勻(一般培養(yǎng)液呈橘紅色);再加入*1~1.1g,至*溶解(呈深紅色);zui后再加三蒸水或去離子水至1L止。

    第二步,插吸管于配好的培養(yǎng)液內(nèi),通入二氧化碳?xì)怏w。隨著二氧化碳?xì)獾娜谌?,液體逐漸變成黃色。用一次性0.22 m孔徑的濾膜于正壓情況下將該液體過濾除菌。在此過程中,由于部分二氧化碳?xì)怏w溢出,液體漸成橘黃色。此時(shí)迅速將其分裝到4個(gè)250ml的瓶內(nèi),一定塞嚴(yán)或擰緊瓶。在無菌情況下取樣本數(shù)毫升,37。c無菌培養(yǎng)72h,確定該批培養(yǎng)液無污染后方可使用。常使用的培養(yǎng)液存放于4℃冰箱內(nèi),其它暫時(shí)不用的可放入一20。c冰箱內(nèi)保存。

    第三步,根據(jù)不同細(xì)胞系的需求添加不同量血清和抗生素。將配好的培養(yǎng)液吸入小培養(yǎng)瓶內(nèi),再將適量細(xì)胞吸入,塞嚴(yán)或擰緊瓶蓋,置37。c普通隔水式恒溫箱內(nèi)即可。操作過程中因有少量二氧化碳?xì)怏w溢出,液體呈橘紅色,酸堿度(pH) 約為7.0~7.2。如果細(xì)胞較少或者生長較慢,液體的pH值似宜偏酸些為好。

    我們的產(chǎn)品原料為進(jìn)口原裝:無菌包裝,不需要做任何除菌的處理,直接使用。


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