ELISA試劑盒測定操作非常簡單，一般涉及到標(biāo)本的收集保存、試劑準(zhǔn)備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結(jié)果判斷和結(jié)果報(bào)告及解釋等方面，ELISA試劑盒其中任一步驟的不當(dāng)都會影響測定結(jié)果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。正確的加樣方法應(yīng)為45度，吸頭貼著孔壁加入，應(yīng)注意角度太小，會使液體殘留在孔壁上，導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)確；吸頭應(yīng)當(dāng)貼著管壁和液面的交界處！
目前臨床上使用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。用于傳染原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測的血清標(biāo)本的收集則沒有時(shí)間和體位方面的影響，用于ELISA試劑盒測定的臨床標(biāo)本zui為常用的是血清（漿），有時(shí)由于特定的檢測目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。對用于激素和治療藥物測定的血清標(biāo)本的收集，要留意收集時(shí)間甚或體位有可能會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。再如治療藥物的檢測，應(yīng)根據(jù)藥代動力學(xué)選擇服藥后的zui適時(shí)間抽血檢測。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r(shí)，血清中腎素活性將泛起顯著增高。如可的松在早晨4～6點(diǎn)之間，會有一峰值泛起：生長激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)性方式開釋，因此，在測定此類激素時(shí)，有必要在緊密親密相連的時(shí)間距離內(nèi)采取數(shù)份血樣本，以其中間值為測定值。只是在處理和保存方面要考慮以下幾個(gè)方面：首先要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。血清標(biāo)本如是以無菌操作分離，則可以在2～8 ℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。ELISA試劑盒樣本的長時(shí)間保存，應(yīng)在-70 ℃以下。樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。
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