細胞凍存好了，接下來要注意什么問題呢?沒錯，就是記得到時間了，拿出來復(fù)蘇。那么，細胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?請看下文：
活力檢查 – 千萬不要使用不健康的細胞，可能有污染，如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!
形態(tài)檢查 – 檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。
凍存細胞：
補充新的培養(yǎng)液 – 在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。
在細胞長至70%單層時收獲細胞，計數(shù)活細胞數(shù)，用凍存液調(diào)整細胞密度 ~5 x106 cells/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整)
凍存液 – 用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞，有不同類型的凍存液，根據(jù)細胞類型選擇zui合適的凍存液:
– 5-10% DMSO – 注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì).
– 5-15% 甘油
– 如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長，應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復(fù)蘇。
在凍存管上標記好細胞類型，日期，凍存人等信息，并保證每凍存管不超過1.5ml.
程序降溫是保證凍存細胞活性的關(guān)鍵，使用 Mr. Frosty保證降溫速度為1°-3°C，置于-80°C冰箱內(nèi)過夜，如果沒有Mr. Frosty裝置，可以使用實驗室常見的泡沫盒、棉花等。.
放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以zui快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi)，因此，此步驟使用干冰，或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意，在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息，做好記錄是非常非常重要的!
還有一個zui重要的，一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞，以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!
細胞復(fù)蘇-正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要，熟記以下要點：
當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細胞時，有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況，使用保護面罩和*十分必要從液氮內(nèi)轉(zhuǎn)移凍存管至熱的容器內(nèi)，應(yīng)在液氮內(nèi)完成
應(yīng)該與37℃水浴中快速溶解凍存的細胞，并保證凍存管蓋子在水面之上以避免污染。當(dāng)zui小的冰塊溶解后，用70%酒精擦拭凍存管，并迅速轉(zhuǎn)移至新的已經(jīng)預(yù)熱的培養(yǎng)基內(nèi)。
觀察細胞生長形態(tài)和生長比率。
其實，細胞復(fù)蘇只是一個簡單的實驗，不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié)，不然，也不一定會盡如人意。例如說，人身健康方面：一定要記得做好防凍工作，戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。
