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技術(shù)文章

大鼠胰淀素（Amylin）ELISA試劑盒實驗操作步驟

閱讀：470發(fā)布時間：2015-1-5

在大鼠胰淀素（Amylin）ELISA試劑盒實驗中我們需要注意一些實驗誤差的問題，下面就是為實驗減少誤差的具體操作步驟：

1．實驗使用前，將所有試劑充分搖勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免在實驗加樣時加入大量的氣泡，實驗時在加樣上產(chǎn)生誤差。

2．根據(jù)待檢測樣品的數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需要使用的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品需根據(jù)自己的數(shù)量來定，如在實驗中能使用復(fù)孔的則盡量做復(fù)孔。

3．將稀釋好后的標準品50ul加入反應(yīng)孔、并加入待測樣品50ul在反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩使其均勻，在37℃的條件下溫育1小時。

4．以上實驗結(jié)束后即甩去孔內(nèi)的液體，每孔均加滿洗滌液，振蕩30秒后，甩去孔內(nèi)的洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)操作3次即可。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)則需增加一次。

5．在每孔中加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩使其搖勻，在37℃的條件下溫育30分鐘。

6．將孔內(nèi)的液體甩去，將每個孔中加滿洗滌液，振蕩30秒后，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7. 將每個孔中均加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩搖勻，在37℃的條件下溫育10分鐘。注意：避免光照。

8．在取出酶標板時，即迅速加入50ul終止液，加入終止液后立即測定結(jié)果。

9．zui后即在450nm波長處測定各孔的OD值。


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